Μοριακή ανίχνευση μεταλλάξεων και πολυμορφισμών των γονιδίων NPHS2, WT1 και ACTN4 σε ασθενείς με ανθεκτικό σε στεροειδή νεφρωσικό σύνδρομο

Abstract

This PhD thesis focuses on the molecular screening for mutations and polymorphisms in three genes, namely NPHS2, WT1 and ACTN4, in patients with steroid resistant nephrotic syndrome. For this purpose, whole blood was isolated from a cohort of 51 patients with steroid resistant nephrotic syndrome and from 100 control cases. DNA was isolated and processed by PCR, DGGE and DNA sequencing using specific primers against the three gene targets. Pathogenic NPHS2 genotypes were identified in three out of 22 sporadic recessive patients (15%). WT1 gene screening of hot spot exons 8 and 9 revealed three mutations in four patients. Molecular screening of ACTN4 gene was performed in patients with dominant familial type of the syndrome and revealed one mutation in one patient and his father following the dominant mode of inheritance. This is the first attempt to describe the genetic background of steroid resistant nephrotic syndrome in Hellenic patients. The results have been published in 2 pubmed indexed scientific journals: 1. Megremis S et al, Genet Test Mol Biomarkers. 2009 Apr;13(2):249-56, doi: 10.1089/gtmb.2008.0083. PMID: 19371226 2. Megremis S et al, Eur J Pediatr. 2011 Dec;170(12):1529-34. doi: 10.1007/s00431-011-1450-5. PMID: 21499692

Η παρούσα διδακτορική διατριβή επικεντρώνεται στην ανίχνευση μεταλλάξεων και πολυμορφισμών των γονιδίων NPHS2, WT1 και ACTN4 στο γενετικό υλικό ασθενών με ανθεκτικό σε στεροειδή νεφρωσικό σύνδρομο (SRNS). Για τον σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκε λήψη ολικού αίματος από 51 ασθενείς καθώς και από 100 υγιή άτομα (ομάδα ελέγχου). Απομονώθηκε γενετικό υλικό το οποίο επεξεργάστηκε με τις μεθόδου PCR, DGGE και DNA sequencing χρησιμοποιώντας ειδικά σχεδιασμένους εκκινητές για τις περιοχές στόχους των γονιδίων. Παθολογικοί NPHS2 γονότυποι αναγνωρίσθηκαν σε 3 από τους 22 ασθενείς με σποραδικό υπολειπόμενο SRNS (15%). Η ανίχνευση των νουκλεοτιδικών αλλαγών στα εσώνια 8 και 9 του γονιδίου WT1 αποκάλυψε 3 γνωστές σημειακές μεταλλάξεις σε 4 ασθενείς. Ο μοριακός έλεγχος του γονιδίου ACTN4 πραγματοποιήθηκε σε 6 παιδιατρικούς ασθενείς με αυτοσωμικό επικρατές SRNS/FSGS όπου βρέθηκε μια παθολογική μετάλλαξη σε έναν ασθενή και στον πάσχοντα πατέρα του. Η παρούσα διατριβή αποτελεί την πρώτη περιγραφή του γενετικού υπόβαθρου ασθενών με ανθεκτικό σε στεροειδή νεφρωσικό σύνδρομο. Τα αποτελέσματά της έχουν δημοσιευθεί σε 2 ξενόγλωσσα επιστημονικά περιοδικά: 1. Megremis S et al, Genet Test Mol Biomarkers. 2009 Apr;13(2):249-56, doi: 10.1089/gtmb.2008.0083. PMID: 19371226 2. Megremis S et al, Eur J Pediatr. 2011 Dec;170(12):1529-34. doi: 10.1007/s00431-011-1450-5. PMID: 21499692