ΜΕΛΕΤΗ ΕΝΖΥΜΩΝ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟΥ ΤΟΥ ΠΟΛΥ(Α) ΣΕ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΑ ΔΙΕΓΕΡΜΕΝΑ ΑΠΟ ΦΥΤΟΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΗ

Abstract

ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΤΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟΥ ΤΟΥ ΠΟΛΥ(Α) (ΠΟΛΥ(Α)-ΠΟΛΥΜΕΡΑΣΗΣ, ΠΟΛΥ(Α)-ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗΣ ΚΑΙ ΠΟΛΥ(Α)- ΕΞΩΝΟΥΚΛΕΑΣΗΣ) ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑΤΟΣ ΑΝΘΡΩΠΙΝΩΝ ΠΕΡΙΦΕΡΙΚΩΝ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΩΝ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΚΑΙ ΔΙΕΓΕΡΜΕΝΩΝ ΜΕ ΤΟ ΜΙΤΟΓΟΝΟ ΦΥΤΟΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΗ (ΡΗΑ). Η ΜΕΛΕΤΗ ΕΝΤΟΠΙΣΤΗΚΕ ΠΡΩΤΑ ΣΕ ΟΛΙΚΑ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΑ. ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΝΕΑ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΠΟΛΥ(Α)-ΝΟΥΚΛΕΑΣΩΝ ΣΕ ΟΛΙΚΑ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΑ. ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΛΕΓΧΘΗΚΑΝ ΜΕ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΣΕ ΕΠΙΠΕΔΟ ΣΗΜΑΝΤΙΚΟΤΗΤΑΣ Ρ<0.01 ΚΑΙ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΤΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΤΡΙΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΑΥΞΑΝΟΥΝ ΜΕ ΤΗΝ ΔΙΕΓΕΡΣΗ ΣΕ ΣΧΕΣΗ ΜΕ ΤΑ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΑ. ΕΙΔΙΚΩΤΕΡΑ, Η ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΠΟΛΥΜΕΡΙΣΜΟΥ ΤΟΥ ΠΟΛΥ(Α)ΔΙΠΛΑΣΙΑΖΕΤΑΙ ΜΕΤΑ ΑΠΟ 72 ΩΡΕΣ ΕΠΩΑΣΗ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΜΕ ΤΟ ΜΙΤΟΓΟΝΟ ΣΕ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΤΟΥΣ ΜΑΡΤΥΡΕΣ, ΕΝΩ Η ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤOΥ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΟΛΥΤΙΚΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΑΥΞΑΝΕΙ ΚΑΤΑ 30% ΚΑΙ ΤΟΥ ΕΞΩΝΟΥΚΛΕΟΛΥΤΙΚΟΥ ΕΠΙΣΗΣ ΔΙΠΛΑΣΙΑΖΕΤΑΙ. ΟΙ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ ΑΥΤΕΣΕΠΑΝΑΛΗΦΘΗΚΑΝ ΚΑΙ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΜΕΡΙΚΟ ΚΑΘΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΩΝ ΜΕ ΜΟΡΙΑΚΗ ΔΙΗΘΗΣΗ ΚΑΙ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΙΟΝΤΟΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ. Η ΜΕΛΕΤΗ ΑΥΤΗ ΣΥΜΠΛΗΡΩΝΕΙ ΤΗΝ ΕΙΚΟΝΑ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΩΝ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΩΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΜΙΤΟΓΟΝΟΥ ΠΟΥ ΔΙΑΘΕΤΑΜΕ ΚΑΙ ΣΕ ΣΥΝΔΙΑΣΜΟ ΜΕ ΤΗΝ ΔΙΕΘΝΗ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΥΠΟΣΤΗΡΙΖΕΙ ΤΑ ΘΕΩΡΗΤΙΚΑΜΟΝΤΕΛΑ ΠΟΥ ΑΝΑΦΕΡΟΥΝ ΟΤΙ ΕΝΑ ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ ΤΜΗΜΑ ΤΗΣ ΡΥΘΜΙΣΗΣ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΕΠΙΤΕΛΕΙΤΑΙ ΜΕΤΑ- ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΑ ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑ ΣΤΟ ΕΠΙΠΕΔΟ ΤΗΣ ΠΟΛΥΑΔΕΝΥΛΙΩΣΗΣ ΤΩΝ MRNA.

THE LEVELS OF ACTIVITY OF THE ENZYMES OF POLY(A)-METABOLISM (POLY(A)- POLYMERASE, POLY(A)-ENDONUCLEASE AND POLY(A)-EXONUCLEASE) WERE STUDIED IN THE CYTOPLASMIC EXTRACTS OF HUMAN PERIPHERAL BOTH NORMAL AND PHA-ACTIVATED LYMPHOCYTES. A NEW METHODOLOGY WAS DEVELOPED FOR THE MEASUREMENTS OF THE ACTIVITY LEVELS OF POLY(A)-NUCLEASES IN CRUDE EXTRACTS. THE RESULTS WERE STATISTICALLY TESTED AND SHOWED THAT THE ACTIVITY LEVELS OF ALL THREE ENZYMES INCREASED SIGNIFICANTLY (P<0.01) UPON MITOGEN ADMINISTRATION, I.E. THE POLY(A)-POLYMERASE ACTIVITY DOUBLED AFTER 72 HOURS OF CULTURE INCUBATION IN THE PRESENCE OF PHA COMPARED TO THE CONTROL, WHILE POLY(A)-ENDONUCLEASE ACTIVITY INCREASED ABOUT 30% AND THE POLY(A)-EXONUCLEASE ACTIVITY ALSO DOUBLED. THESE RESULTS WERE CONFIRMED AFTER PARTIAL PURIFICATION OF THE ENZYME ACTIVITIES APPLYING MOLECULAR SIERING AND ION-EXCHANGE CHROMATOGRAPHY. THIS STUDY ADDS TO THE PICTURE OF DIFFERENTIATION SYSTEM OF MITOGEN- ACTIVATED LYMPHOCYTES. TAKING INTO ACCOUNT THE LATEST LITERATURE ON THE SUBJECT OF DIFFERENTIATION AND GENE CONTROL, THIS STUDY SUPPORTS PROPOSED MODELS, THAT THE CONTROL OF GENE EXPRESSION IS ALSO ACCOMPLISHED POST-TRANSCRIPTIONALLY IN THE CYTOPLASM, AT THE LEVEL OF MRNA-POLYADENYLATION.