Υποδοχείς σωματοστατίνης και ντοπαμίνης: συσχέτιση με το σύστημα mtor στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε καρκινοειδές πνεύμονα και καρκίνου του επινεφριδίου

Abstract

Lung carcinoids (LCs) are rare tumors generally resistant to chemotherapy. Somatostatin analogues are presently used as medical therapy for the control of tumor growth and hormone secretion, and recently the mTOR inhibitor Everolimus has been evaluated in a large clinical trial for NETs. No data are available about the use of Cabergoline in the treatment of these tumors. The aim of our study is to evaluate the effect of the combined treatment of Octreotide and Cabergoline in combination with mTOR inhibition in the only existing in vitro model of typical LCs: H727 cell line.Methods: In H727 cell line RT-qPCR and Immunofluorescence were established to characterize the expression of the mTOR pathway components, somatostatin receptor 2 (SSTR2) and dopamine receptor 2 (D2R). 15 typical LCs tissues have been used for SSTR2, D2R, p70S6K and pp70S6K expression and localization by immunohistochemistry. Cell viability, FACS analysis and western blot have been assessed to test the pharmacological effects of Octreotide, Cabergoline and mTORinhibition.Results: Octreotide and Cabergoline did not reduce cell viability as single agents but, when combined with an mTOR inhibitor, they were able to potentiate the mTOR inhibitory effect after long term exposure and concomitantly reducing Akt phosforilation and increasing REDD1/DDIT4 expression. Conclusions: the single use of Octreotide and Cabergoline is not sufficient to block the cell growth but the combinatorial approach of these agents with mTORi might reduce the mTOR inhivition induced escape mechanism potentiating the effect of the mTORi single use in this in vitro model of typical LCs.

Τα καρκινοειδή του πνεύμονα είναι σπάνιοι όγκοι ανθεκτικοί στη χημειοθεραπεία. Τα ανάλογα σωματοστατίνης χρησιμοποιούνται σήμερα στη θεραπεία για τον έλεγχο της αύξησης του όγκου και της έκκρισης ορμονών, και πρόσφατα ο αναστολέας mTOR everolimus δοκιμάζεται σε μεγάλες κλινικές μελέτες των νευροενδοκρινών όγκων. Δεν υπάρχουν δεδομένα για τη χρήση της καβεργολίνης στη θεραπεία αυτών των όγκων. Ο σκοπός της μελέτης μας είναι να αξιολογηθεί η δράση του συνδυασμού οκτρεοτίδης /καβεργολίνης με τους αναστολείς mTOR in vitro στη μοναδική κυτταρική σειρά τυπικού καρκινοειδούς πνεύμονα: Η727.Μέθοδοι: Στην κυτταρική σειρά Η727 χαρακτηρίστηκε το μονοπάτι του mTOR, ο υποδοχέας σωματοστατίνης 2 (SSTR2) και ο υποδοχέας ντοπαμίνης 2 (D2R) με RT-qPCR και ανοσοκυτταροχημεία φθορισμού. Δεκαπέντε ιστικά δείγματα ασθενών με τυπικό καρκινοειδές των βρόγχων χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη της έκφρασης των SSTR2, D2R, p70S6K και pp70S6K με ανοσοϊστοχημεία. Η κυτταρική βιωσιμότητα, η κυτταρομετρία ροής και το western blot αξιολογήθηκαν προκειμένου να μελετηθεί η δράση της οκτρεοτίδης, της καβεργολίνης και των αναστολέων mTOR.Αποτελέσματα: Η οκτρεοτίδη και η καβεργολίνη μεμονωμένα δεν αναστέλλουν την κυτταρική βιωσιμότητα αλλά σε συνδυασμό με τους αναστολείς mTOR φαίνεται να ενισχύουν την ανασταλτική δράση των αναστολέων mTOR μετά από μακρά έκθεση και ταυτόχρονα μειώνουν τη φωσφορυλίωση του Akt και αυξάνουν την έκφραση του REDD1/DDIT4.Συμπεράσματα: Η μεμονωμένη χρήση της οκτρεοτίδης και της καβεργολίνης δεν επαρκεί για την αναστολή της κυτταρικής αύξησης αλλά ο συνδυασμός τους με τους αναστολείς mTOR θα μπορούσε να περιορίσει τον μηχανισμό διαφυγής που επάγεται από τους αναστολείς mTOR σε μοντέλο τυπικού καρκινοειδούς πνεύμονα in vitro.