Μελέτη της σύστασης εκχυλισμάτων φύλλων ligustrum lucidum ως προς την παρουσία βιοενεργών ενώσεων με τη χρήση συνδυαστικών τεχνικών ενόργανης ανάλυσης

Abstract

THE AIM OF THIS THESIS WAS TO INVESTIGATE THE PLANT LIGUSTRUM LUCIDUM IN ORDER TO UNVEIL PHARMACOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES. METHANOLIC AND AQUEOUS EXTRACTS OF DIFFERENT GEOGRAPHICAL ORIGIN AND DIFFERENT SEASONALLY COLLECTED PERIODS ARE INVESTIGATED. 1H NMR SPECTRA OF THE EXTRACTS DEMONSTRATE A VERY CHARACTERISTIC VALUE FOR THE PRESENCE OF FLAVONOIDS. WITH THE USE OF PROPER TEMPERATURE AND BY SPIKING WITH STANDARDS, FLAVONES WERE DETECTED AND EXTRACTS WERE FURTHER ANALYSED BY HPLC-ESI-MS. VARIOUS COMPOUNDS WERE TENTATIVELY IDENTIFIED BELONGING TO THE CLASSES OF FLAVONOIDS AND SECOIRIDOIDS SHOWED THAT THERE IS A SMALL BUT SIGNIFICANT QUALITATIVE DIFFERENTATION BETWEEN THE PHENOLIC CONTENT AND CLEAR QUANTITATIVE DIFFERENTATION. THE EXTRACTION EFFICIENCY WITH DIFFERENT METHODS AND SOLVENTS OF LEAVES OF LIGUSTRUM LUCIDUM WAS ALSO INVESTIGATED. BASED ON THE RESULTS ETHYL ACETATE EXTRACT WAS CHOSEN FOR THE APPLICATION OF THE HPLC-SPE-NMR TECHNIQUE. THE RESULTS SHOWED THAT LIGUSTRUM LUCIDUM EXTRACTS ARE RICH IN SECOIRIDOIDS AND FLAVONOIDS IN BOTH FREE AND GLUCOSIDIC FORM. SEVERAL FLAVONOIDS WERE INDENTIFIED FOR THE FIRST TIME IN THE EXTRACTS FROM THE LEAVES OF THIS PLANT (APIGENIN 6,8-DI-C- GLUCOSIDE, APIGENIN-7-O- RUTINOSIDE, QUERCETIN DERIVATIVE, CINNAMOYLQUINIC ACID). FINALLY A NOVEL METHOD FOR THE DETERMINATION OF TOTAL PHENOLIC CONTENT USING 1H NMR SPECTROSCOPY IN THE –OH SPECTRAL REGION WAS INVESTIGATED. DETERMINATION OF THE INTEGRALS OF THE1H NMR ABSORPTION BANDS IN THE REGION OF PHENOL –OH GROUPS WHICH ARE ELIMINATED OR THEY ARE REDUCED IN INTENSITY UPON IRRADIATION OF THE RESIDUAL WATER RESONANCE IN DMSO-d6 ALLOWS THE QUANTITATION OF THE TOTAL PHENOLIC CONTENT. A SIMPLE METHOD WAS ALSO APPLIED WHICH ALLOWS THE DISCRIMINATION OF THE PHENOLIC ACID –COOH GROUPS. THE PRESENT 1H NMR METHOD IS A NEW PROMISING TOOL FOR THE ESTIMATION OF TOTAL PHENOLIC CONTENT IN A WIDE RANGE OF MATRIXES.

ΜΕΤΑΞΥ ΤΩΝ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ ΠΟΥ ΕΠΗΡΕΑΖΟΥΝ ΤΗ ΣΥΣΤΑΣΗ ΤΩΝ ΦΥΤΙΚΩΝ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΣΕ ΒΙΟΕΝΕΡΓΑ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ ΘΕΩΡΕΙΤΑΙ Ο ΧΡΟΝΟΣ ΣΥΛΛΟΓΗΣ, Η ΠΕΡΙΟΧΗ ΑΛΛΑ ΚΑΙ Ο ΤΡΟΠΟΣ ΕΚΧΥΛΙΣΗΣ. ΓΙΑ ΤΟ ΣΚΟΠΟ ΑΥΤΟ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΘΗΚΑΝ ΜΙΑ ΣΕΙΡΑ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΑΠΟ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΦΥΛΛΩΝ LIGUSTUM LUCIDUM ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΣΥΛΛΕΧΘΗΚΑΝ ΑΠΟ ΔΥΟ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΕΣ ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΤΗΣ ΕΛΛΑΔΟΣ (ΙΩΑΝΝΙΝΑ: ΒΟΡΕΙΟΔΥΤΙΚΗ ΕΛΛΑΔΑ ΚΑΙ ΚΑΡΙΑΝΗ: ΒΟΡΕΙΑ ΕΛΛΑΔΑ) ΚΑΙ ΕΚΧΥΛΙΣΤΗΚΑΝ ΜΕ ΜΕΘΑΝΟΛΗ ΚΑΙ ΝΕΡΟ. ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΑΥΤΩΝ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑΣ NMR 1Η ΚΑΙ ΤΗΣ ΣΥΝΔΥΑΣΤΙΚΗΣ ΤΕΧΝΙΚΗΣ LC-ESI MSn. Η ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΤΩΝ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΔΕΝ ΑΛΛΑΞΕ ΠΟΙΟΤΙΚΑ ΤΟ ΦΑΙΝΟΛΙΚΟ ΠΡΟΦΙΛ ΤΩΝ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΑΛΛΑ ΜΟΝΟ ΠΟΣΟΤΙΚΑ. Η ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΗ ΠΕΡΙΟΧΗ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΑ ΑΠΟ ΤΗΝ ΙΔΙΑ ΠΟΙΚΙΛΙΑ ΑΛΛΑ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΥ ΣΤΑΔΙΟΥ ΩΡΙΜΑΝΣΗΣ ΕΧΟΥΝ ΠΑΡΟΜΟΙΟ ΦΑΙΝΟΛΙΚΟ ΠΡΟΦΙΛ. Ο 6,8-ΔΙ -C- ΓΛΥΚΟΖΙΤΗΣ ΤΗΣ ΑΠΙΓΕΝΙΝΗΣ, 7-Ο-ΡΟΥΤΙΝΟΖΙΤΗΣ ΤΗΣ ΑΠΙΓΕΝΙΝΗΣ ΚΑΙ Ο 7-Ο- ΓΛΥΚΟΖΙΤΗΣ ΤΗΣ ΑΠΙΓΕΝΙΝΗΣ ΕΙΝΑΙ ΤΑ ΦΛΑΒΟΝΟΕΙΔΗ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΣΕ ΟΛΑ ΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΚΑΙ ΜΠΟΡΟΥΝ ΝΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΟΥΝ ΩΣ ΚΡΙΤΗΡΙΟ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ. ΤΑΥΤΟΧΡΟΝΑ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΔΙΑΛΥΤΗ ΕΚΧΥΛΙΣΗΣ ΣΤΗ ΣΥΣΤΑΣΗ ΤΩΝ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΜΕ ΤΗΝ ΤΕΧΝΙΚΗ LC-ESI MSn ΚΑΙ LC-SPE-NMR. Η ΧΡΗΣΗ ΤΩΝ ΤΕΧΝΙΚΩΝ ΑΥΤΩΝ ΕΠΕΤΡΕΨΕ ΤΗΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΦΑΙΝΟΛΙΚΩΝ ΣΥΣΤΑΤΙΚΩΝ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ ΑΝΑΦΕΡΟΝΤΑΙ ΩΣ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ ΦΥΛΛΩΝ ΤΟΥ LIGUSTUM LUCIDUM (6,8-ΔΙ -C- ΓΛΥΚΟΖΙΤΗΣ ΤΗΣ ΑΠΙΓΕΝΙΝΗΣ, 7-Ο-ΡΟΥΤΙΝΟΖΙΤΗΣ ΤΗΣ ΑΠΙΓΕΝΙΝΗΣ, ΠΑΡΑΓΩΓΑ ΤΗΣ ΚΕΡΚΕΤΙΝΗΣ ΚΑΙ ΤΟ ΚΙΝΑΜΟΥΛΚΟΥΙΝΙΚΟ ΟΞΥ). ΕΠΙΣΗΣ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΟΛΙΚΩΝ ΦΑΙΝΟΛΩΝ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΠΡΩΤΟΝΙΑΚΗΣ ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑΣ ΠΥΡΗΝΙΚΟΥ ΜΑΓΝΗΤΙΚΟΥ ΣΥΝΤΟΝΙΣΜΟΥ (NMR 1Η). Η ΧΡΗΣΗ ΤΗΣ ΜΑΘΟΔΟΛΟΓΙΑΣ NMR 1Η ΑΠΟΤΕΛΕΙ ΜΙΑ ΕΝΑΛΛΑΚΤΙΚΗ ΚΑΙ ΠΡΩΤΟΤΥΠΗ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΤΕΧΝΙΚΗ ΠΟΥ ΕΠΙΤΡΕΠΕΙ ΤΟΝ ΑΚΡΙΒΗ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΟΛΙΚΩΝ ΦΑΙΝΟΛΩΝ ΣΕ ΟΠΟΙΟΔΗΠΟΤΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΚΑΙ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΑΡΚΕΤΑ ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΣΕ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΤΗΝ ΚΛΑΣΙΚΗ ΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟ FOLIN-CIOCALTEAU.