ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΤΗΣ FLOW INJECTION ANALYSIS (FIA) ΚΑΙ ΤΩΝ ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΣΤΗΝ ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΚΑΙ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΥΓΡΩΝ

Abstract

ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΑΝ ΔΙΑΦΟΡΕΣ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΣΥΣΤΑΤΙΚΩΝ ΤΩΝ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΚΑΙ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΥΓΡΩΝ ΜΕ ΤΗΝ ΤΕΧΝΙΚΗ FIA. Η ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΣΤΗΡΙΧΘΗΚΕ ΣΤΗΝ ΤΟΠΟΘΕΤΗΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΩΝ ΑΠΛΗΣ ΣΕΙΡΙΑΚΗΣ ΔΙΑΤΑΞΗΣ ΜΕ ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΕΝΖΥΜΑ ΣΕ ΣΥΣΚΕΥΗ FIA, ΠΟΥ ΣΥΝΑΡΜΟΛΟΓΗΘΗΚΕ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΚΑΙ ΣΤΗ ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΙΑΦΟΡΩΝ ΣΥΣΤΑΤΙΚΩΝ. ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΚΑΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΑΝ: ΟΞΕΙΔΑΣΗ ΤΗΣ ΓΛΥΚΟΖΗΣ: ΓΛΥΚΟΖΗ ΣΕ ΟΡΟ ΑΙΜΑΤΟΣ, ΜΕ ΚΑΤΩΤΕΡΟ ΟΡΙΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΩΝ (LLQ) 0,43MG.DL-1, ΣΧΕΤΙΚΗ ΤΥΠΙΚΗ ΑΠΟΚΛΙΣΗ (RSD) 1,10% ΚΑΙ ΔΥΝΑΤΟΤΗΤΑ 80 ΜΕΤΡΗΣΕΩΝ ΑΝΑ ΩΡΑ. ΑΜΥΛΟΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ: ΔΙΑΛΥΤΗ ΑΜΥΛΟΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ (LLQ=0,016MG.ML-1, RSD=0,46%, 65ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ). ΜΑΛΤΟΖΗ (LLQ=71ΜMOL.L-1, RSD=0,66%, 60 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ.ΑΜΥΛΟ ΣΕ ΣΙΤΑΛΕΥΡΑ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΛΗΡΗ ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΔΙΑΣΠΑΣΗ. ΑΠΟΚΛΕΙΣΤΙΚΑ ΜΕ ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΗΜΕΝΗ ΑΜΥΛΟΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ ΚΑΙ ΑΠΟΚΛΙΣΗ ΤΗΣ ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΑΠΟ ΤΗΝ ΕΠΙΣΗΜΗ ΠΟΛΩΣΙΜΕΤΡΙΚΗ-0,33%. ΟΞΕΙΔΑΣΗ ΤΗΣ Α-ΦΩΣΦΟΡΙΚΗΣ ΓΛΥΚΕΡΟΛΗΣ : ΔΙΑΛΥΤΗ ΟΞΕΙΔΑΣΗ (LLQ=0,782MG.ML-1, RSD=0,53%, 75 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ). Α-ΦΩΣΦΟΡΙΚΗ ΓΛΥΚΕΡΟΛΗ (LLQ=0,74ΜMOL.L-1, RSD=0,05%, 84 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ. ΣΤΑΘΕΡΑ ΤΑΧΥΤΗΤΑΣ ΑΠΟΙΚΟΔΟΜΗΣΗΣ ΤΗΣ Α-ΦΩΣΦΟΡΙΚΗΣ ΓΛΥΚΕΡΟΛΗΣ ΣΕ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΟΡΟΥ ΑΣΘΕΝΩΝ -106,5Ε-4 MIN-1. ΚΙΝΑΣΗ ΤΗΣ ΓΛΥΚΕΡΟΛΗΣ: ATP (LLQ =4,71ΜMOL.L-1, RSD=1,77%, 72 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ) MG (LLQ=0,341ΜMOL.L-1, RSD=3,40%, 72 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ). ΓΛΥΚΕΡΟΛΗ (LLQ=2,05ΜMOL.L-1, RSD=0,27%, 72 ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΑΝΑ ΩΡΑ). Η ΓΛΥΚΕΡΟΛΗ ΣΤΟΝ ΟΡΟ ΤΥΧΑΙΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ ΚΥΜΑΙΝΕΤΑΙ ΑΠΟ 25-240ΜMOL.L-1. ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΓΛΥΚΕΡΟΛΗΣ ΣΕ ΚΡΑΣΙΑ, ΣΕ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΤΗΝ ΕΠΙΣΗΜΗ ΣΤΑΘΜΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟ ΤΟΥ AOAC, ΕΔΕΙΞΕ ΜΕΣΗ% ΑΠΟΚΛΙΣΗ + - 0,37%.

THE DEVELOPMENT OF SEVERAL AUTOMATED FIA ANALYTICAL METHODS FOR THE DETERMINATION OF INGREDIENTS IN FOODSTUFFS AND BIOLOGICAL FLUIDS, IS DESCRIBED. THE PROCEDURE INVOLVES THE INSERTATION OF SINGLE BEAD STRING REACTORS (WITH DIFFERENT IMMOBILIZED ENZYMES) IN A HOME-MADE FIA SYSTEM AND THE SIMPLE, FAST AND ACCURATE SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF THE ANALYTES. THE FOLLOWING ENZYMESWERE IMMOBILIZED AND WERE DETERMINED: GLUCOSE OXIDASE: GLUCOSE IN THE SERUM (LOWER LIMIT OF QUANTITATION, LLQ =0,43MG.DL-1, RELATIVE STANDARD DEVIATION, RSD=1,10% AND 80 DETERMINATION /HOUR). AMYLOGLUCOSIDASE: SOLUBLE AMYLOGLUCOSIDASE (LLQ=0,016MG.ML-1, RSD =046% 65 DETERMINATIONS/HOUR). MALTOSE (LLQ=71ΜMOL.L-1, RSD=0,66%, 60 DETERMINATIONS/HOUR). STARCH IN WHEAT FLOURS, AFTER WHOLE DIGESTION TO GLUCOSE WITH IMMOBILIZED AMYLOGLUCOSIDASE. THE MEAN RELATIVE DEVIATION BETWEEN THE OFFICIAL POLARIMETRIC AND THE PROPOSED METHOD WAS FOUND-0,33%. A-GLYCEROPHOSPHATE OXIDASE: SOLUBLE OXIDASE (LLQ=0,782MG.ML-1, RSD=0,53%, 75 DETERMINATIONS/HOUR). A-GLYCEROPHOSPHATE (LLQ=0,74ΜMOL.L-1, RSD=0,05%, 84 DETERMINATIONS/HOUR). FOLLOWING DEPROTEINIZATION OF HUMAN SERUM SAMPLES, A CONTINUOUS DECLINE OF A-GLYCEROPHOSPHATE CONCENTRATION HAS BEEN MONITORED, WITH KOBS=-106,5E-4MIN-1. GLYCEROL KINASE: ATP (LLQ =4,71ΜMOL.L-1, RSD=1,77%, DETERMINATIONS/HOUR). MG(LLQ=0,341ΜMOL.L-1, RSD =3.40%, 72 DETERMINATIONS/HOUR). GLYCEROL (LLQ=2,05ΜMOL.L-1, RSD=0,27%, 72 DETERMINATIONS/HOUR). THE FREE GLYCEROL CONCENTRATION IN HUMAN SERUM FOUND RANGES FROM 50 TO 240ΜMOL.L-1. GLYCEROL HAS BEEN PERFORMED IN THE WINES. (ABSTRACT TRUNCATED).