ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΤΗΣ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ VIAB ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΟΥ SALMONELLA TYPHI

Abstract

ΤΟ ΑΝΤΙΓΟΝΟ VI ΑΝΙΧΝΕΥΕΤΑΙ ΚΥΡΙΩΣ ΣΤΑ ΣΤΕΛΕΧΗ SALMONELLA TYPHI ΚΑΙ S. PARATYPHI C. ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ ΑΥΤΗΣ ΕΓΙΝΕ Η ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΗ, Η ΕΚΦΡΑΣΗ ΚΑΙ Η ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΩΝ ΤΗΣ ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ VIAB ΤΗΣ S.TYPHI TY2. Η ΜΕΤΑΛΛΑΞΟΓΕΝΕΣΗ ΜΕ ΤΟ ΜΕΤΑΘΕΤΟ ΣΤΟΙΧΕΙΟ TUS ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ Η ΠΕΡΙΟΧΗ ΠΟΥ ΕΙΧΕ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΘΕΙ ΣΤΟ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟ PVTI ΚΑΙ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΣΕ ΓΙΑ ΤΟ ΑΝΤΙΓΟΝΟ VI ΕΙΧΕ ΜΕΓΕΘΟΣ 15 KB. ΕΓΙΝΕ Η ΑΠΟΔΕΙΞΗ ΟΤΙ Η ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΜΕΝΗ ΠΕΡΙΟΧΗ ΗΤΑΝ ΠΡΑΓΜΑΤΙΚΑ Η ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΠΕΡΙΟΧΗ VIAB ΤΗΣ S.TYPHI TY2. ΑΝΙΧΝΕΥΘΗΚΑΝ ΤΟΥΛΑΧΙΣΤΟΝ ΟΚΤΩ ΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΑ ΠΟΥ ΠΑΡΑΓΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΜΕΝΗ ΠΕΡΙΟΧΗ, ΣΕ ΕΝΑ ΣΥΣΤΗΜΑ MAXI-CELLS. ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΟΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΜΕΤΑΛΛΑΓΩΝ ΣΤΗ ΠΕΡΙΟΧΗ VIAB ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΔΥΟ ΑΠΟ ΑΥΤΑ ΤΑΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΑ, 80 ΚΑΙ 65 KDA ΕΙΝΑΙ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΓΙΑ ΤΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ ΑΝΤΙΓΟΝΟΥ ΣΤΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑ. Η ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΟΔΙΑΤΑΞΗΣ ΕΝΟΣ ΤΜΗΜΑΤΟΣ DNA, 9728 BP, ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΠΕΡΙΕΧΟΝΤΑΙ ΕΠΤΑ ΑΝΟΙΚΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΑΝΑΓΝΩΤΗΣ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΝ ΓΙΑ ΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΑ ΕΚ ΤΩΝ ΟΠΟΙΩΝ Η ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΑΛΛΕΣ ΓΝΩΣΤΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΕΔΕΙΞΕΟΤΙ 4 ΑΠΟ ΑΥΤΑ ΣΥΜΜΕΤΕΧΟΥΝ Σ'ΕΝΑ ΣΥΣΤΗΜΑ ABC ΜΕΤΑΦΟΡΕΩΝ ΑΝΑΛΟΓΟ ΜΕ ΤΗ ΠΕΡΙΟΧΗ BEX ΤΟΥ HEMOPHILUS INFLUENZAE.

THE VI ANTIGEN IS A SURFACE POLYSACCHARIDE FOUND MAINLY IN SALMONELLA TYPHI AND S. PARATYPHI C. THE PRESENT STUDY WAS UNDERTAKEN TO DEFINE THE VIAB LOCUS OFS.TYPHI. THE CLONING, EXPRESSION AND ANALYSIS OF VIAB DETERMINANTS FROM S.TYPHI TY2 WAS DESCRIBED. TRANSPOSON TU5 MUTAGENESIS DEMONSTRATED THAT THE VI-ANTIGEN- ENCODING REGION ON PVTI WAS CONTAINED ON A 15 KB FRAGMENT. THIS DNA SEQUENCE WAS DEMONSTRATED TO BE THE VIAB LOCUS OF S.TYPHI TY2. IN E.COLI SE5000MAXI CELLS, THE VIAB DETEMINANTS ENCODED AT LEAST 8 POLYPEPTIDES. FUNCTIONALCHARACTERIZATION OF VIAB MUTATIONS IN S.TYPHI TY2 SUGGESTED THAT THE 80 AND 65 KDA PROTEINS WERE REQUIRED FOR CELL-SURFACE LOCALIZATION OF THE VI ANTIGEN. NUCLEOTIDE SEQUENCE OF A DNA FRAGMENT OF 9728 BP FROM THE PVT3 WAS DETERMINED AND IT HAS REVEALED THAT 7 OPEN READING FRAMES WERE CONTAINED. HOMOLOGY BETWEEN THE PUTATIVE PROTEINS ENCODED BY THESE 7 DRFS AND KNOWN PROTEIN SEQUENCES WERE SEARCHED. FOUR POLYPEPTIDES SHARED HOMOLOGY WITH PROTEINS OF THE BEXLOCUS OF HAEMOPHILUS INFLUENZAE. THUS, THEY ARE ASSUMED TO PARTICIPATE IN AABC TRANSPORTERS SYSTEM.