Ανάπτυξη πρωτότυπης μεθόδου ταυτόχρονης ανίχνευσης είκοσι (20) αυτοαντισωμάτων σε χρόνια αυτοάνοσα ηπατικά και εξωηπατικά νοσήματα

Abstract

Introduction: Autoantibody testing for diagnosis of autoimmune liver disease is demanding. More than a dozen (or more) antigen-specific autoantibodies need to be tested. A multiparametric assay for the simultaneous detection of these autoantibodies is currently missing.Aim: to develop a prototype profil ELISA for the simultaneous detection of 20 liver related autoantibodies.Methods: An in house multiparametric ELISA was developed and tested in a large cohort of patients with autoimmune liver diseases.Results: The ELISA is based on 12 antigenic preparations from mitochondrial (5), nuclear (3) and liver specific (4) antigens. The prototype ELISA is highly sensitive and specific and can be use for the accurate detection of liver autoantibody serology.Conclusion: This is the first multiparametric liver autoantibody ELISA profil. More antigens can be displayed on the platform in the near future.

Εισαγωγή:Τα αυτοαντισώματα που χρησιμοποιούνται για τη διαγνωστική προσέγγιση ασθενών με πιθανά αυτοάνοσα νοσήματα του ήπατος είναι πολλά και μια απλή, λειτουργική, ευαίσθητη και ειδική μέθοδος που να τα προσμετρά ταυτόχρονα δεν έχει αναπτυχθεί μέχρι σήμερα.Σκοπός: Σκοπός της διατριβής ήταν να αναπτύξει μια πρωτότυπη μέθοδο για την ταυτόχρονη ανίχνευση των διαγνωστικά σημαντικών αυτοαντισωμάτων χρόνιων ηπατοπαθειών.Μέθοδοι: Χρησιμοποιήθηκαν οροί από ασθενείς με Πρωτοπαθή Χολική Κίρρωση (ΠΧΚ), Αυτοάνοση ηπατίτιδα (ΑΗ) και Πρωτοπαθή Σκληρυντική Χολαγγειίτιδα (ΠΣΧ) για την ανάπτυξη πολυμετρικής profil ELISA. Χρησιμοποιήθηκαν 11 ανασυνδυασμένα και 1 καθαρμένο αυτοαντιγόνο.Αποτελέσματα: Στην πρώτη φάση αναπτύχθηκε μια πολυμετρική ELISA που επιτυχώς προσδιορίζει όλα τα αυτοαντισώματα έναντι των μιτοχονδριακών αντιγόνων (5). Ενώ στη δεύτερη φάση η ELISA εμπλουτίστηκε με 3 πυρηνικά αυτοαντιγόνα με διαγνωστική αξία για την ΠΧΚ. Στη τρίτη φάση η πολυμετρική ELISA εμπλουτίστηκε με 3 κύρια αυτοαντιγόνα για την ΑΗ (σύνολο 11). Στο τελικό στάδιο το ΤΤΒ5 ειδικό αντιγόνο για την ΠΣΧ προστέθηκε επιτυχώς στο panel των αντισωμάτων.Συμπέρασμα: H πρωτότυπη ELISA είναι πιο ευαίσθητη και εξίσου ειδική με τις in house ELISA που έχουν περιγραφεί και υπερτερεί των εμπορικά διαθέσιμων. Είναι η πρώτη που μπορεί να ανιχνεύσει 12 αυτοαντισώματα ταυτόχρονα.