Προσδιορισμός της συμβολής υπόπτων γονιδίων υπευθύνων για την ηλικιακή εκφύλιση της ωχράς κηλίδας στην Ελλάδα

Abstract

PURPOSE: Evaluation of the contribution of polymorphisms in the genes CFH, ARMS2, APOE, FCGR2A, susceptibility to disease manifestation AMD (age-related macular degeneration) in the Greek population.METHODOLOGY: DNA isolation was performed by column centrifugation QIAamp, blood from patients with AMD and healthy volunteers (on ophthalmic control). For genotyping of polymorphisms in the genes APOE and ARMS2 used technique PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Length Polymorphism) and further developed a new methodology to real-time PCR and melting curve analysis of polymorphisms Y402H in CFH and H131R in FCGR2A . The statistical analysis was performed with SNPStats and SPSS programs.RESULTS: Initial testing performed for correlation of these four genes with AMD in blood samples of 27 patients and 34 healthy volunteers demonstrating a strong causality of disease with Y402I in CFH (OR = 2,68) and H131R in FCGR2A (OR = 3.17) while there was no statistically significant causality disease with polymorphisms in ARMS2 and ApoE. In the second year was studied, in samples of 120 patients and 103 healthy, the contribution of polymorphisms in CFH and FCGR2A event for AMD which there seemed to be a statistically significant relationship with OR = 1,77 and 1,74 respectively. CONCLUSION: The novel study of AMD association with polymorphism H131R in FCGR2A gene yielded significant results, suggesting a strong correlation and relative risk for carriers of the mutation.

ΣΚΟΠΟΣ : Αξιολόγηση της συμβολής των πολυμορφισμών στα γονίδια CFH ,ARMS2, APOE ,FCGR2A στην προδιάθεση για εκδήλωση ΗΕΩ (ηλικιακής εκφύλισης ωχράς κηλίδας) στον Ελληνικό πληθυσμό.ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ : Η απομόνωση του DNA πραγματοποιήθηκε με στήλες φυγοκέντρησης QIAamp,από αίμα ασθενών με ΗΕΩ και υγιών (κατόπιν οφθαλμολογικού ελέγχου). Για τη γονοτύπωση των πολυμορφισμών στα γονίδια ARMS2 και APOE χρησιμοποιήθηκε η τεχνική PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Length Polymorphism) και επιπλέον αναπτύχθηκε νέα μεθοδολογία με PCR πραγματικού χρόνου και ανάλυση καμπύλων τήξης για τον πολυμορφισμό Y402H του γονιδίου CFH και H131R του FCGR2A. Ακολούθησε στατιστική ανάλυση με προγράμματα SNPStats και SPSS .ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ : Πραγματοποιήθηκε αρχικά έλεγχος για συσχετισμό των 4 γονιδίων αυτών με την ΗΕΩ σε δείγματα αίματος 27 πασχόντων και 34 υγιών εθελοντών αναδεικνύοντας μια ισχυρή συσχέτηση της νόσου με τους Υ402Η στο CFH (OR=2,68) και H131R στο FCGR2A (OR=3.17) ενώ δεν υπήρξε στατιστικά σημαντική συσχέτηση της νόσου με τους πολυμορφισμούς σε ARMS2 και ApoE . Σε δεύτερο χρόνο μελετήθηκε σε δείγματα 120 ασθενών και 103 υγιών η συμβολή των πολυμορφισμών στα CFH και FCGR2A για εκδήλωση ΗΕΩ όπου φάνηκε να υπάρχει στατιστικά σημαντική συσχέτηση με OR=1,77 και 1,74 αντίστοιχα. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ : Η μελέτη για πρώτη φορά της συσχέτισης της ΗΕΩ με τον πολυμορφισμό Η131R απέδωσε σημαντικά αποτελέσματα, προτείνοντας ισχυρή συσχέτιση και μεγάλο σχετικό κίνδυνο για τους φορείς της μετάλλαξης.