ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΕΠΑΓΩΓΙΚΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΗΣ ΑΙΜΙΝΗΣ ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΑ ΛΕΥΧΑΙΜΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ K562

Abstract

ΤΟ ΚΕΝΤΡΙΚΟ ΘΕΜΑ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΑΠΟΤΕΛΕΙ Η ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΜΟΡΙΑΚΩΝ ΜΗΧΑΝΙΣΜΩΝΔΡΑΣΗΣ ΤΩΝ ΑΙΜΟΠΟΡΦΥΡΙΝΩΝ ΚΑΙ ΕΙΔΙΚΟΤΕΡΑ ΤΗΣ ΑΙΜΙΝΗΣ ΩΣ ΕΠΑΓΩΓΕΑ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΗΣ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ ΟΤΙ Η ΑΙΜΙΝΗ ΔΡΑ ΚΑΙ ΩΣ ΡΥΘΜΙΣΤΗΣ ΤΗΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΣ ΑΝΑΠΤΥΞΗΣ ΚΑΙ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗΣ. ΟΠΩΣ ΦΑΝΗΚΕ ΑΠΟ ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Α) Η ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΤΗΣ ΑΙΜΙΝΗΣ ΣΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ Κ562 ΑΚΟΛΟΥΘΕΙ ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΜΕΤΑΦΟΡΑΣ ΚΟΡΕΣΜΟΥ. ΕΠΩΑΣΗ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ Κ562 ΜΕ ΘΡΥΨΙΝΗ (ΠΡΩΤΕΟΛΥΤΙΚΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ) Η ΜΕ ΜΗ ΡΑΔΙΟΕΠΙΣΗΜΑΣΜΕΝΗ ΑΙΜΙΝΗ ΜΕΙΩΝΕΙ ΤΗΝ ΠΡΟΣΛΗΨΗ ΤΗΣ ΑΙΜΙΝΗΣ ΑΠΟ ΑΥΤΑ. ΤΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΑΥΤΑ ΜΑΖΙ ΜΕ ΑΛΛΕΣ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ ΠΟΥ ΕΓΙΝΑΝ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΜΑΣ (TSAMADOU ET AL, 1992, TSAMADOU AND TSIFTSOGLOU) ΥΠΟΔΕΙΚΝΥΟΥΝ ΟΤΙ Η ΑΙΜΙΝΗ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΕΙΣΕΡΧΕΤΑΙ ΣΤΟ ΕΠΙΠΕΔΟ ΤΗΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΣ ΜΕΜΒΡΑΝΗΣ. Β) ΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ Κ562 ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΑΡΚΕΤΕΣ ΔΙΑΛΥΤΕΣ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΠΟΥ ΣΥΝΔΕΟΝΤΑΙ ΕΚΛΕΚΤΙΚΑ ΜΕ ΑΙΜΙΝΗ. ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΥΤΕΣ ΑΠΟΤΕΛΟΥΝ ΕΝΑ ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ ΠΟΣΟΣΤΟ ΤΩΝ ΔΙΑΛΥΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΩΝΠΡΩΤΕΙΝΩΝ (8-12%) ΠΟΥ ΔΙΑΦΕΡΟΥΝ ΣΕ ΜΟΡΙΑΚΑ ΒΑΡΗ ΚΑΙ ΠΙΘΑΝΟΝ ΝΑ ΣΥΜΒΑΛΛΟΥΝ ΣΤΗΝ ΕΜΦΑΝΙΣΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΗΣ ΑΙΜΙΝΗΣ. Γ) ΚΑΠΟΙΕΣ ΑΠΟ ΑΥΤΕΣ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΟΥΝ ΕΚΛΕΚΤΙΚΑ ΚΑΙ ΔΗΜΙΟΥΡΓΟΥΝ ΣΥΜΠΛΟΚΑ ΜΕ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΟ DNA ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΜΕ ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΤΟΥ Β-ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΗΣ. Δ) Η ΑΙΜΙΝΗ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΙ ΜΕ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟ ΒΑΘΜΟΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑΣ, ΤΙΣ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΑΣΕΙΣ ΜΕΤΑΞΥ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΩΝ ΚΑΙ ΠΥΡΗΝΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ Κ562 ΜΕ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΕΣ ΑΚΟΛΟΥΘΙΕΣ ΤΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΩΝ Β- ΚΑΙ Ε-ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΗΣ ... (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

THE CENTRAL OBJECTIVE OF THIS THESIS HAS BEEN THE ANALYSIS OF MOLECULAR MECHANISMS VIA WHICH OF HEMIN INDUCES GLOBIN GENE EXPRESSION IN HUMAN ERYTHROLEUKEMIA CELLS. OUR RESULTS THUS FAR INDICATED THAT: A) THE UPTAKE OF [59FE]-LABELLED HEMIN IN K562 CELLS IS BOTH TEMPERATURE AND CONCENTRATION DEPENDENT PROCESS WHICH EXHIBITS A CONVENTIONAL SATURATION KINETICS. HEMINS UPTAKE IS REDUCEDBY TRYPSIN TREATMENT OF K562 CELLS AND BY THE ADDITION OF NONLABELLED HEMIN.THESE FINDINGS TEND TO SUGGEST THAT HEMIN IS LIKELY TO ENTER K562 CELLS VIA A RECEPTOR MEDIATED PROCESSES LIKE THE ONE OBSERVED IN MURINE ERYTHROLEUKEMIA CELLS. B) K562 CELLS CONTAIN SEVERAL SOLUBLE CYTOPLASMIC AND NUCLEAR PROTEINS WHICH ARE ATTACHED OF HEME-AGAROSE AFFINITY COLUMN AND ELUTED WITH HIGH MOLAR UREA, AND UNDER SPECIFIC CONDITIONS OF ELUTION. THESE PROTEINS REPRESENT A SUBSTANTIAL PROPORTION OF SOLUBLE CYTOPLASMIC PROTEINS AND BELONG TO SEVERAL CLASSES WITH VARIOUS MOLECULAR WEIGHT. A FEW OF THE HEMIN BINDING PROTEINS (HEBPS) INTERACT AND FORM COMPLEXES WITH SHEARED DNA PREPARED FROM K562 CELLS AS SHOWN BY SEPHADEX G-150 CHROMATOGRAPHY. C) INCUBATION OF [32P]-LABELLED FRAGMENTS OF GENOMIC Β- AND Ε- GLOBIN DNA WITH EITHER CYTOPLASMIC OR NUCLEAR FACTORS FROM K562 CELLS LED TO THE FORMATION OF SOLUBLE COMPLEXES INDICATING THAT K562 CELLS CONTAIN FACTORS THAT INTERACT WITH DISCRETE DNA SEQUENCES LOCATED UPSTREAM FROM THE 5'-END OF THE GENES. ... (ABSTRACT TRUNCATED)