Μεταγραφική ρύθμιση της έκκρισης του TNFα σε ανθρώπινα μακροφάγα και αναστολή της έκκρισης του μέσω αντικογικών (antisense) ανασταλτικών μορίων

Abstract

Tumor necrosis factor-α (TNFα) contributes significantly in pathogenesis of chronic inflammatory diseases, like rheumatoid arthritis. The interaction of transcription factors is essential in the regulation of gene expression. In this study we tried to characterize the mechanism by which NF-κΒ family members interact with other transcription factors (C/EBPβ and c-Jun) to regulate TNFα gene expression. It was shown that all three of these factors could activate TNFα promoter. It was also found that adjacent κΒ3 and AP-1 sites in the proximal human TNFα promoter contribute independently to LPS-induced activation of TNFα promoter. Although both κΒΙ and KB3 sites bound transcriptionally active NF-κΒ p65/p50 heterodimers, only the κΒΙ site contributes to down-regulation by NF-κΒ p50 homodimers. Besides, a different approach in regulating TNFα gene expression, is to control TNFα mRNA translation procedure. Antisense mRNA molecules are used to inhibit mRNA translation. We attempted to develop an effective adenovirus-based strategy, to deliver functionally active antisense TNFα molecules, to specifically suppress TNFα in primary human macrophages. We found that specific suppression of TNFα in macrophages is possible, employing a directed antisense approach (ASTNF216 molecule) and a promoter system (CMV promoter or Visna LTR), which is efficient in human macrophages.

Στην παθογένεια χρόνιων φλεγμονωδών νοσημάτων, όπως η ρευματοειδής αρθρίτιδα, είναι κεντρικός ο ρόλος του TNFα. Η γνώση της μεταγραφικής ρύθμισης του γονιδίου του TNFα αποτελεί απαραίτητη προϋπόθεση της κατανόησης της έκφρασης του. Στην παρούσα εργασία έγινε προσπάθεια να προσδιοριστούν οι μηχανισμοί με τους οποίους μεταγραφικοί παράγοντες (NF-κΒ, c-Jun και C/EBPß) επιδρούν στην έκφραση του ανθρώπινου γονιδίου του TNFα. Βρέθηκε ότι οι γειτνιάζουσες θέσεις σύνδεσης του προαγωγέα του TNFα κΒ3 και ΑΡ-1, συνεισφέρουν ανεξάρτητα στην επαγόμενη με LPS διέγερση του γονιδίου. Επίσης, τόσο η θέση κΒΙ όσο και η θέση κΒ3 συνδέουν μεταγραφικά ενεργά ετεροδιμερή NF-κΒ p65/ρ50, ενώ βρέθηκε ότι μόνο η θέση κΒΙ συνεισφέρει στην ελαττωμένη έκφραση του γονιδίου του TNFα σε επανειλημμένη διέγερση με LPS. Ερευνήθηκε επίσης η αναστολή της έκφρασης του γονιδίου του TNFα μέσω αντιλογικών TNFα μορίων (AS-TNFα), μεταφερόμενων διαμέσου ιογενών γονιδιακών φορέων (τροποποιημένων αδενοϊών). Αποδείχθηκε ότι είναι εφικτή η καταστολή της έκκρισης TNFα από τα ανθρώπινα μακροφάγα, με την εφαρμογή ειδικών αντιλογικών μορίων (ASTNF216) και ενός συστήματος προαγωγέα (CMV promoter ή Visna LTR), το οποίο είναι έντονα αποτελεσματικό στα ανθρώπινα μακροφάγα.