Έλεγχος του κυτταρικού πολλαπλασιαμού και της απόπτωσης στον προστάτη

Abstract

The purpose of this study was to analyse cell proliferation and apoptosis in the developing rat prostate by immunohistochemistry, western blotting and Tunel technique for the labeling in situ of fragmented DNA. Cell proliferation index, calculated from 7th to 56th days after birth, was at a maximum during initial stages of prostate morphogenesis and the highest number of epithelial cells labeled with anti-PCNA or/and anti-Ki-67 antibodies were counted the 7th day of age and diminish thereafter. The study of p53 expression in the rat prostate during the same period of development revealed that the highest number of labeled cells was present in the gland at 21 day. Because serum and testis androgen are at their lowest level at the day it is possible that this triggers the increase of p53 expression. The effects of castration upon prostate development were studied in young rats 28 and 56 days of age, after testis removal at the sixth day. The Tunel technique was applied on the involuted prostate and the apoptotic cells were counted. The apoptotic index decreases with age in the castrated animals while it remains constant in the control group. Mitotic index was also reduced both in the castrated animals and in the control group. Surprisingly, an increase in the PCNA-positive cells was observed in the castrated animals at the 56th day of age. This increase may reflect the participation of the protein in the process of fragmented DNA repair mechanism. It has also been demonstrated that IGF-I is expressed in the epithelial cells of the developing prostate. The immunostaining was prominent at the luminal surface of the epithelial cells. This result is in accordance with its mitogenic activity. In addition, an increased expression of PCNA was observed in human prostatic tissues from patients with benign prostatic hyperplasia. In contrast, the expression of Ki-67 and p53 in the same tissues was minimal. This needs further investigation.

Στην παρούσα διατριβή εκτιμήθηκε ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός στον αναπτυσσόμενο προστάτη του αρουραίου με ανοσοϊστοχημική εντόπιση των αντιγόνων του κυτταρικού πολλαπλασιασμού Ki-67 και PCNA. Τα αποτελέσματα, που επιβεβαιώθηκαν με αποτύπωση Western, έδειξαν ότι προοδευτικά ελαττώνονται οι πρωτεΐνες αυτές στα επιθηλιακά κύτταρα από τις 7 έως τις 56 ημέρες ΜΓ. Επίσης μελετήθηκε στις ίδιες ηλικίες, ο ρόλος της πρωτεΐνης p53 η οποία συμμετέχει στη διακοπή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού μετά από πιθανή βλάβη του DNA κατά την αντιγραφή αυτού. Η παρατηρηθείσα αιχμή της έκφρασης της p53 στις 21 ημέρες συνδυάζεται με την ελάχιστη τιμή των ανδρογόνων, η οποία μετράται σε αυτή την ηλικία. Προφανώς, η στέρηση των ανδρογόνων επάγει την αύξηση της έκφρασης της πρωτεΐνης. Τα αποτελέσματα της στέρησης των ανδρογόνων σε νεαρούς αρουραίους ηλικίας 28 και 56 ημερών, μετά από ευνουχισμό στις 6 ημέρες ΜΓ, αναλύθηκαν με εφαρμογή της μεθόδου Tunel, για την εκτίμηση του αποπτωτικού δείκτη και της ανοσοϊστοχημικής εντόπισης των αντιγόνων Ki-67/PCNA για την εκτίμηση του μιτωτικού δείκτη. Διαπιστώθηκε ότι ο αποπτωτικός δείκτης ελαττώνεται με την πάροδο της ηλικίας σε αντίθεση προς τους μάρτυρες όπου διατηρείται σταθερός. Ο αριθμός των κυττάρων που πολλαπλασιάζονται μειώνεται σε σχέση προς την ηλικία στα ευνουχισμένα ζώα, όπως και στους μάρτυρες. Η παρατηρηθείσα αύξηση του PCNA στα ευνουχισμένα πειραματόζωα, ηλικίας 56 ημερών, αντικατοπτρίζει, πιθανώς την συμμετοχή της πρωτεΐνης στην επιδιόρθωση του κερματισμένου DNA. Η έκφραση του IGF-Ι στον αναπτυσσόμενο προστάτη είναι αναμενόμενη λόγω της μιτογόνου δράσης αυτού. Διαπιστώθηκε ότι χρωματίζονται τα επιθηλιακά κύτταρα και ιδιαίτερα η προσαύλειος παρυφή αυτών σε όλες τις ηλικίες που εξετάστηκαν. Τέλος στην καλοήθη προστατική υπερπλασία, επειδή ενεργοποιείται ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός παρατηρήθηκε αυξημένη έκφραση του PCNA. Αντίθετα ελάχιστη αντίδραση ανιχνεύθηκε για τις πρωτεΐνες p53 και Κi-67. Το τελευταίο χρήζει περαιτέρω διερεύνησης.