ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΓΛΥΚΟΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΗΣ (G.L.P.) ΤΟΥ SLIME ΤΡΙΩΝ ΠΡΟΤΥΠΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝPSEUDOMONAS AERUGINOSA ΚΑΙ ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΑΥΤΗΣ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΙΣ ΟΜΟΙΟΤΗΤΕΣ Η ΤΙΣ ΔΙΑΦΟΡΕΣ ΜΕ ΤΟ ΛΙΠΟΠΟΛΥΣΑΚΧΑΡΙΤΗ (L.P.S.) ΤΟΥ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΟΥ

Abstract

LIPOPOLYSACCHARIDE (LPS) SLIME AND OUTER MEMBRANES WERE OBTAINED FROM A SMOOTH NON MUCOID PSEUDOMONAS AERUGINOSA STRAIN PAC-IR AND ITS TWO ROUGH MUTANTS PAC 557 AND PAC 605. ELECTROPHORETIC ANALYSIS ON SDS- POLYACRYLAMIDE GELS AND STRAINING WITH SILVER AND COOMASSIE BLUE SHOWED DIFFERENT PROFILES BETWEEN LPS SLIME AND OUTER MEMBRANES IN ALL THREE STRAINS. COMPARATIVE ANALYSIS OF THE SACCHARIDE MOIETY, BETWEEN LPS AND SLIME OF EACH STRAIN BY HPLC DEMONSTRATED THAT THE SACCHARIDE MOIETY OF SLIME HAS DIFFERENT COMPOSITION FROM THAT OF LPS. SIX MENTALSUGARS RHAMMOSE, FUCOSE, XYLOSE, MANNOSE, GALACTOSE AND GLUCOSE WERE IDENTIFIED IN ALL THREE SLIMES, THOUGH IN DIFFERENT AMOUNTS MANNOSE AND GALACTOSE WERE NOT FOUND IN THE SMOOTH LPS WHERE AS ONLY RHAMMOSE AND GLUCOSE WERE IDENTIFIED IN THE LPS OF THE ROUGH STRAINS-COMPARATIVE ANALYSIS OF THE LIPID MOIETY BETWEENLPS AND SLIME IN ALL THREE STRAIN WITH GAS CHROMATOGRAPHY AND MASS SPECTROSCOPY INDICATED THAT LIPID MOIETY HAD NO QUALITATIVE DIFFERENCES CONCERNING THE LIPID ACIDS. FIVE LIPID ACIDS WERE IDENTIFIED IN ALL THREE SLIMES AND LPSS (-C12),2OH(-C12), (- C14), (-C16), (-C18) AND ITS ISOMERIC FORMS. AFTER GEL FILTRATION OF ALL THREE SLIMES THE POLYSACCHARIDE OBTAINS FROM THE CARBOHYDRATE PEAK FRACTION WAS FOUND TO BE PROTEIN FREE. BY GEL FILTRATION THE MOLECULAR SIZE OF THEPOLYSACCHARIDES WAS ESTIMATED TO BE ABOUT 40.000-100.000 DALTONS. THESE RESULTS SUGGESTS THAT SLIME PRODUCTION IS A COMMON PROPERTY SHARED BY BOTH SMOOTH ANDROUGH P.AERUGINOSA STRAINS. THE SACCHARIDE MOIETY OF SLIME DOES NOT REPRESENT THE SIDE CHAINS OF LPS AND IT IS PROTEIN FREE.

ΑΠΟ 3 ΠΡΟΤΥΠΑ ΣΤΕΛΕΧΗ P.AERUGINOSA, ΤΟ SMOOTH ΣΤΕΛΕΧΟΣ PAC-IR ΚΑΙ ΤΑ ROUGH ΣΤΕΛΕΧΗ PAC-557 ΚΑΙ PAC-605 ΠΑΡΕΛΗΦΘΗΣΑΝ ΜΕ ΕΙΔΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ Ο LPS, Η ΕΞΩΚΥΤΤΑΡΙΑΟΥΣΙΑ (SLIME) ΚΑΙ ΟΙ ΕΞΩΤΕΡΙΚΕΣ ΜΕΜΒΡΑΝΕΣ. ΕΓΙΝΑΝ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΕΙΣ (SDS-PAGE) ΚΑΙ ΧΡΩΣΗΣ COOMASSIE ΕΙΔΙΚΗ ΓΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΚΑΙ AGNO3 ΕΙΔΙΚΗ ΓΙΑ ΛΙΠΟΠΟΛΥΣΑΚΧΑΡΙΤΕΣ (LPS). ΟΙ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΕΣ ΕΙΚΟΝΕΣ ΤΟΥ SLIME ΔΙΑΦΕΡΟΥΝ ΑΠ'ΑΥΤΕΣ ΤΟΥ LPS ΚΑΙ ΤΗΝ ΕΞΩΤΕΡΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ. ΑΝΑΛΥΣΙΣ ΤΩΝ ΟΥΔΕΤΕΡΩΝ ΣΑΚΧΑΡΩΝ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΚΑΙ ΤΑ 3 SLIME ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΜΕ ΠΟΣΟΤΙΚΕΣ ΔΙΑΦΟΡΕΣ 6 ΣΑΚΧΑΡΑ, ΤΗ ΦΟΥΚΟΖΗ, ΤΗΝ ΞΥΛΟΖΗ, ΤΗ ΜΑΝΟΖΗ,'Η ΤΗ ΓΑΛΑΚΤΟΖΗ. ΑΝΤΙΘΕΤΑ ΜΑΝΟΖΗ ΚΑΙ ΓΑΛΑΚΤΟΖΗ ΔΕΝ ΠΕΡΙΕΧΟΝΤΑΙ ΣΤΟ SMOOTH LPS ΕΝΩ ΟΙ ROUGH LPS ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΜΟΝΟ ΡΑΜΝΟΖΗ ΚΑΙ ΓΛΥΚΟΖΗ. ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥ ΛΙΠΙΔΙΚΟΥ ΣΤΟΙΧΕΙΟΥ ΤΩΝ 3 SLIME ΚΑΙ ΤΩΝ 3 LPS ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΠΟΙΟΤΙΚΑ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ 5 ΙΔΙΑ ΛΙΠΑΡΑ ΟΞΕΑ. ΔΩΔΕΚΑΝΟΙΚΟ ΟΞΥ (- C12), 2OH-ΔΩΔΕΚΑΝΟΙΚΟ (-C12) ΔΕΚΑΤΕΤΡΑΝΙΚΟ ΟΞΥ (-C14), ΔΕΚΑΕΞΑΝΙΚΟ ΟΞΥ (-C16) ΔΕΚΑΟΚΤΑΝΙΚΟ ΟΞΥ (-C18) ΚΑΙ ΤΑ ΙΣΟΜΕΡΗ ΤΟΥ . ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΔΙΗΘΗΣΗΣ ΣΤΑ 3 SLIME Ο ΠΟΛΥΣΑΚΧΑΡΙΤΗΣ ΠΟΥ ΠΑΡΑΛΑΜΒΑΝΕΤΑΙ ΑΠΟΤΗΝ ΥΔΑΤΟΑΝΘΡΑΚΙΚΗ ΚΟΡΥΦΗ, ΔΕΝ ΠΕΡΙΕΧΕΙ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΚΑΙ ΕΙΝΑΙ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ 40.000-100.000 DALTONS. ΑΡΑ Η ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΤΟΥ SLIME ΕΙΝΑΙ ΚΟΙΝΗ ΙΔΙΟΤΗΤΑ SMOOTH ΚΑΙ ROUGH ΣΤΕΛΕΧΩΝ P.AERUGINOSA ΚΑΙ ΤΟ ΥΔΑΤΟΑΝΘΡΑΚΙΚΟ ΣΤΟΙΧΕΙΟ ΤΟΥ SLIME ΕΙΝΑΙ ΑΥΤΟΤΕΛΗΣ ΟΥΣΙΑ ΕΛΕΥΘΕΡΗ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΠΟΥ ΔΕΝ ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΤΙΣ ΠΛΕΥΡΙΚΕΣ ΑΛΥΣΙΔΕΣ.