ΠΡΟΣΕΓΓΙΣΕΙΣ ΣΤΗΝ ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΜΕΤΑΤΡΟΠΗ ΤΗΣ ΧΙΤΙΝΗΣ ΣΕ ΧΙΤΟΖΑΝΗ: ΕΤΕΡΟΛΟΓΗ ΕΚΦΡΑΣΗΤΗΣ ΑΠΑΚΕΤΥΛΑΣΗΣ ΤΗΣ ΧΙΤΙΝΗΣ ΤΟΥ ΜΥΚΗΤΑ ΜUCOR ROUXII ΚΑΙ ΓΕΝΕΤ...

Abstract

Η ΧΙΤΟΖΑΝΗ ΕΙΝΑΙ ΕΝΑ ΠΟΛΥΜΕΡΕΣ ΙΔΙΑΙΤΕΡΑ ΧΡΗΣΙΜΟ ΣΕ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ. ΜΙΑ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΥΣΑ ΠΡΟΣΕΓΓΙΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΤΗΣ ΑΠΟΤΕΛΕΙ Η ΜΕΤΑΤΡΟΠΗ ΤΗΣ ΧΙΤΙΝΗΣ ΠΡΟΣ ΧΙΤΟΖΑΝΗ ΑΠΟ ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΑΠΑΚΕΤΥΛΑΣΗ ΤΗΣ ΧΙΤΙΝΗΣ. ΣΤΟΧΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΗΤΑΝ Η ΙΚΑΝΟΠΟΙΗΤΙΚΗ ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΗΣ ΚΑΛΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΕΝΗΣ ΑΠΑΚΕΤΥΛΑΣΗΣ ΤΗΣΧΙΤΙΝΗΣ ΑΠΟ ΤΟ ΜΥΚΗΤΑ MUCOR ROUXII ΣΕ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΑ ΕΥΧΡΗΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ Η ΜΕΛΕΤΗ ΝΕΩΝ ΑΠΑΚΕΤΥΛΑΣΩΝ ΑΠΟ ΤΟΝ ΜΥΚΗΤΑ SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Η ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΔΟΚΙΜΑΣΤΗΚΕ ΣΕ ΜΙΑ ΠΟΙΚΙΛΙΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΕΠΙΤΕΥΧΘΗΚΕ ΣΤΗ ΜΕΘΥΛΟΤΡΟΦΗ ΖΥΜΗ PICHIA PASTORIS. ΤΟ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΟ ΕΝΖΥΜΟ ΕΧΕΙ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΠΑΡΟΜΟΙΑ ΜΕ ΤΟ ΦΥΣΙΚΟ ΕΝΖΥΜΟ, ΕΝΩ ΕΚΚΡΙΝΕΤΑΙ ΣΕ ΠΟΛΥ ΚΑΘΑΡΗ ΜΟΡΦΗ (90%) ΚΑΙ ΙΚΑΝΟΠΟΙΗΤΙΚΗ ΠΟΣΟΤΗΤΑ (50MG/L). ΕΠΙΣΗΣ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΔΥΟ ΝΕΑ ΓΟΝΙΔΙΑ ΑΠΑΚΕΤΥΛΑΣΗΣ ΑΠΟ ΤΟ ΣΑΚΧΑΡΟΜΥΚΗΤΑ ΤΩΝ ΟΠΟΙΩΝ Η ΕΚΦΡΑΣΗ ΕΙΝΑΙ ΣΠΟΡΙΟΕΙΔΙΚΗ ΚΑΙ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΗ ΓΙΑ ΤΟΝ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ ΣΠΟΡΙΩΝ.

CHITOSAN IS A BIOPOLYMER USED FOR VARIOUS BIOTECHNOLOGICAL APPLICATIONS. AN ATTRACTIVE BIOTECHNOLOGICAL PROCEDURE FOR THE PRODUCTION OF CHITOSAN IS THE CONVERSION OF CHITIN TO CHITOSAN BY THE ENZYME CHITIN DEACETYLASE. THE AIM OF THIS DISSERTATION WAS THE HETEROLOGOUS EXPRESSION OF THE WELL CHARACTERISED CHITINDEACETYLASES FROM THE FUNGUS MUCOR ROUXII AND THE MOLECULAR AND BIOLOGICAL CHARACTERIZATION OF TWO NEW CHITIN DEACETYLASES FROM THE YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE. SUCCESFUL EXPRESSION OF THE ENZYME WAS ACHIEVED IN THE METHYLOTROPHIC YEAST PICHIA PASTORIS. THE PROPERTIES OF THE RECOMBINANT ENZYME WERE COMPARABLE TO THOSE OF THE NATIVE ENZYME WHILE ADDITIONALLY THE ENZYME WAS SECRETED IN ALMOST PURE FORM AND SUFFICIENT YIELD (~50GR/L). TWO NEW CHITIN DEACETYLASES WERE CLONED FROM SACCHAROMYCES CEREVISIAE. THEIR EXPRESSION IS SPORULATION SPECIFIC AND THEY ARE REQUIRED FOR THE PROPER FORMATION OF THE ASCOSPOREWALLS.