Γενετικά μονοπάτια στην παθογένεση των αδενωμάτων παραθυρεοειδή αδένα

Abstract

Parathyroid gland plays a significant role in regulatory homeostasis of calcium, magnesium and phosphorus, as they secrete parathormone. Parathyroid adenoma constitutes the most common cause of primary hyperparathyroidism, overproducing parathormone and oversecreting calcium. The aim of the present study is to evaluate the potential role of ANXA2, MED12, CALM1, MAPK1 and VDR genes in pathogenesis of parathyroid adenoma. Sixty patients with parathyroid adenoma and 60 healthy individuals without history of carcinoma or autoimmune disease took part in our study. Blood samples from both groups (patients and control) were collected, from which genomic DNA was extracted. Genotyping was performed with polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism assay (RFLP). For the immunohistochemical study, tissue samples after parathyroidectomy were collected and prepared for the antigen retrieval, the antigen-antibody interaction and staining evaluation. Fifty patients and 50 healthy volunteers were enrolled in the study. VDR gene TaqI polymorphism was found to have statistical significant distribution among these two groups, whereas no association was detected for FokI, ApaI and BsmI (VDR) , rs7170178 (ANXA2), rs 1057519912 (MED12), rs12885713(CALM1) και rs1057519911 (MAPK1) polymorphisms and parathyroid adenoma pathogenesis. ANXA2, MAPK1, MED12 and VDR proteins were stained positive in parathyroid adenoma tissue, ranging from mild to intense intensity, while CALM1 protein was not evaluated due to technical difficulties and failure during immunohistochemical preparation. The genetics of parathyroid adenoma is a novel research field that gain ground nowadays. The awareness of the genetic pathways involved in parathyroid adenoma pathogenesis may give new opportunities to the diagnosis and treatment of this disease. VDR, ANXA2, MED12 and MAPK1 proteins could be applied as biomarkers during the diagnosis of parathyroid adenoma, in the differential diagnosis of parathyroid tumors (hyperplasia or carcinoma), while they can be correlated to the clinical symptoms.

Οι παραθυρεοειδείς αδένες είναι βασικά λειτουργικά όργανα που έχουν καθοριστικό ρόλο στη ρύθμιση της ομοιόστασης του ασβεστίου, μαγνησίου και φωσφόρου στον οργανισμό, παράγοντας την παραθορμόνη. Το αδένωμα παραθυρεοειδή αδένα αποτελεί τη συχνότερη αιτία πρωτοπαθή υπερπαραθυρεοειδισμού και προκαλεί υπερπαραγωγή παραθορμόνης και υπερέκκριση ασβεστίου. Σκοπός την παρούσας μελέτης είναι η μελέτη του πρωτεϊνικού προφίλ σε ιστολογικά δείγματα αδενώματος του παραθυρεοειδή αδένα των πρωτεϊνών CALM1, ANXA2, MED12, MAPK1και VDR και περαιτέρω η διερεύνηση γενετικών αλλαγών στα υπό μελέτη αυτά γονίδια για το ρόλο τους στο εν λόγω πρωτέωμα. Στη μελέτη έλαβαν μέρος 60 ασθενείς με αδένωμα παραθυρεοειδή αδένα προς χειρουργική αντιμετώπιση και 60 υγιή άτομα νοσηλευόμενα για άλλη πάθηση χωρίς ιστορικό κακοήθειας ή αυτοάνοσης νόσου. Διενεργήθηκε λήψη δείγματος περιφερικού αίματος των ασθενών και των υγιών ατόμων, από το οποίο απομονώθηκε ολικό γονιδιωματικό DNA, ακολούθησε PCR και ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης και μελέτη με την τεχνική πολυμορφισμών μήκους θραυσμάτων περιορισμού (RFLP). Για την ανοσοϊστοχημική μελέτη, χρησιμοποιήθηκε υλικό από την ιστολογική εξέταση των χειρουργικών παρασκευασμάτων, το οποίο μετά την διαδικασία αντιγονικής ανάκτησης και επώασης, εξετάσθηκε στο μικροσκόπιο. Πενήντα ασθενείς και 50 υγιή άτομα συμπεριλήφθηκαν στην γονιδιακή μελέτη. Ο πολυμορφισμός TaqI του γονιδίου VDR αναγνωρίσθηκε ως προδιαθεσικός παράγοντας για την ανάπτυξη αδενώματος παραθυρεοειδή αδένα. Οι λοιποί πολυμορφισμοί FokI, ApaI and BsmI (VDR) καθώς και rs7170178 (ANXA2), rs 1057519912 (MED12), rs12885713(CALM1) και rs1057519911 (MAPK1) δεν βρέθηκε να έχουν θετική συσχέτιση με το αδένωμα παραθυρεοειδή αδένα. Από την ανοσοϊστοχημική μελέτη, οι πρωτεΐνες ΑΝΧΑ2, ΜΑΡΚ1, MED12 και VDR αναγνώρισθηκαν με ήπια έως έντονη έκφραση στο αδένωμα παραθυρεοειδή αδένα, ενώ η πρωτεΐνη CALM1 δεν κατέστη δυνατό να αξιολογηθεί λόγω τεχνικών δυσκολιών και αποτυχιών στη διαδικασία της χρώσης. Η μελέτη της γονιδιακής βάσης του σποραδικού αδενώματος παραθυρεοειδή αδένα αποτελεί πεδίο αιχμής στην έρευνα με σκοπό την αναγνώριση των γενετικών μονοπατιών που εμπλέκονται στην παθογένεση της νόσου. Οι πρωτεΐνες VDR, ANXA2, MED12 και MAPK1 μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες στη διάγνωση της νόσου, στη διαφοροδιάγνωση από την υπερπλασία και το καρκίνωμα παραθυρεοειδή αδένα καθώς και να συσχετισθούν με την κλινική συμπτωματολογία της νόσου.