Ανοσοϊστοχημική μελέτη της δράσης της απιγενίνης στο πνευμονικό παρέγχυμα σε πειραματικό μοντέλο πρόκλησης οξείας παγκρεατίτιδας

Abstract

Background: Acute pancreatitis is a disease concerning a big majority of the global population. It is characterized by pancreatic tissue damage and morphological changes leading to malfunction of the organ. The most common risk factors for AP are gallstones and alcoholism. Furthermore, AP has been linked to various complications, such as lung damage. Apigenin is a powerful anti-inflammatory flavonoid, that can be used in experimental models in order to prevent and treat acute pancreatitis. Our goal was to evaluate the beneficial effects of apigenin in the lung parenchyma in experimental mice models of Acute Pancreatitis. Methods: We used 126 pulmonary tissue specimens of Wistar mice. The samples were divided into three groups: S in which the mice underwent a virtual surgery, C in which the mice underwent surgery that caused AP, A in which the mice underwent surgery that caused AP while Apigenin was induced. At first Hematoxylin and Eosin staining was performed and then we conducted indirect immunohistochemistry to evaluate the expression of the inflammatory biomarkers MMP-9, HSP-60 and HSP-70.Results: MMP-9 expression was found higher with statistical significance in group A as compared to the other two groups, in both 12 and 24 hours. In 48h MMP-9 expression was higher in group C, whereas in 72h MMP-9 expression was lower in group C. We observed that HSP60 and HSP70 expression was higher (p<0.01) in group A compared to the other two groups at 12h and 24h. As far as HSP60 expression is concerned, this result remained the same at 48h, while there was no statistically significant difference of HSP70 expression among the groups. Lastly, HSP60 and HSP70 expression were higher with statistical significance in group C at 72h as compared to the other two groups. Conclusion: In this experimental trial we observed that apigenin may have a protective role against pulmonary damage, due to acute pancreatitis. However, these results need to be further elucidated in future clinical trials.

Εισαγωγή:Η οξεία παγκρεατίτιδα (ΟΠ) αποτελεί μια νόσο που αφορά μεγάλο ποσοστό του παγκόσμιου πληθυσμού. Χαρακτηρίζεται από βλάβη του παγκρεατικού ιστού, που οδηγεί σε μορφολογικές μεταβολές και παγκρεατική δυσλειτουργία. Οι κυριότεροι παράγοντες κινδύνου είναι η χολολιθίαση και ο αλκοολισμός. Προκαλεί επιπλοκές σε απομακρυσμένα όργανα, όπως είναι ο πνεύμονας. Η απιγενίνη αποτελεί ένα ισχυρό αντιφλεγμονώδες φλαβονοειδές, που μπορεί να χορηγηθεί σε πειραματικό μοντέλο στοχεύοντας στην πρόληψη και στη θεραπεία της ΟΠ. Σκοπός της έρευνας είναι η εκτίμηση της ευεργετικής δράσης της απιγενίνης στο πνευμονικό παρέγχυμα σε πειραματικό μοντέλο επίμυος μετά από πρόκληση ΟΠ.Μέθοδοι: Χρησιμοποιήθηκαν τομές παραφίνης από πνεύμονες 126 επίμυων τύπου Wistar. Τα δείγματα χωρίσθηκαν σε τρεις ομάδες: S (οι επίμυες υποβλήθηκαν σε εικονικό χειρουργείο), C (οι επίμυες υποβλήθηκαν σε χειρουργείο πρόκλησης οξείας παγκρεατίτιδας), Α (οι επίμυες υποβλήθηκαν σε χειρουργείο πρόκλησης οξείας παγκρεατίτιδας και χορήγηση απιγενίνης). Οι ομάδες C και Α διαχωρίσθηκαν περαιτέρω ανάλογα με την χρονική στιγμή που διενεργήθηκε η ευθανασία. Στις τομές πραγματοποιήθηκε χρώση αιματοξυλίνης εωσίνης και έμμεση ανοσοϊστοχημεία για τον δείκτη MMP-9 καθώς και για τους δείκτες HSP60 και HSP70 .Αποτελέσματα: Η έκφραση του MMP-9 βρέθηκε υψηλότερη με στατιστικά σημαντική διαφορά στην ομάδα A συγκριτικά με τις άλλες δυο ομάδες, στις 12h και στις 24h. Στις 48h, η έκφραση ήταν υψηλότερη στην ομάδα C σε σχέση με τις άλλες δυο ομάδες. Τέλος, στις 72h, τα επίπεδα ήταν χαμηλότερα στην ομάδα Α συγκριτικά με τις άλλες δύο ομάδες. Η έκφραση των HSP60 και ΗSP70 ηταν υψηλότερη με στατιστικά σημαντική διαφορά στην ομάδα Α συγκριτικά με τις άλλες δυο ομάδες, στις 12h και στις 24h. Για τον δείκτη HSP60 τα αποτελέσματα παρέμειναν τα ίδια και στις 48 ώρες, ενώ για τον HSP70 δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων. Τέλος τόσο ο HSP60 όσο και ο HSP70 είχαν στατιστικά σημαντικά υψηλότερη έκφραση στην ομάδα C στις 72h, σε σχέση με τις ομάδες Α και S.Συμπεράσματα: Συμπερασματικά, η προστατευτική δράση της απιγενίνης στο πνευμονικό παρέγχυμα, σε πειραματικό μοντέλο οξείας παγκρεατίτιδας είναι ενθαρρυντική. Εντούτοις απαιτείται η διενέργεια περισσότερων μελετών, προκειμένου να επιβεβαιωθούν τα αποτελέσματα.