Η επίπτωση των παθογόνων μυκητών σαν ισχυρών διεγερτών της ανοσιακής απόκρισης σε σηπτικούς ασθενείς

Abstract

Aime of the study: To study the differences of monocyte activation by albicans and non-albicans species of Candida and its change in sepsis.Methods: Peripheral blood mononuclear cells were isolated from 17 healthy volunteers and 26 patients with severe sepsis/shock and incubated in the absence/presence of heat-killed (HK) isolates of four different Candida species and purified β-D-glucan from C.albicans. Experiments were repeated in the presence and absence of inhibitors of intracellular activation pathways. Expression of ANNEXIN-V on cells membranes of monocytes and lymphocytes, cytoplasmic activity of caspase-3 and DNA fragmentation of monocytes were studied. In addition superinfection by C.albicans in septic mice by E.coli was studied. Splencells were stimulated for TNF-α production and ANNEXIN-V expression was measured.Results: Membrane expression of ANNEXIN-V on viable monocytes of healthy volunteers decreased significantly after incubation with C.albicans but not with non-albicans species. The decrease was dose-dependent from the Candida inoculum and by the concentration of β-D-glucan. A relation with inhibition of apoptosis was found as the activity of caspase-3 activity and the level of DNA-fragmentation were also decreased. Incubation in the absence/presence of inhibitors showed that the decrease by ANNEXIN-V expression resulted by activation of the dectin-1 pathway and Raf-1 by β-D glucan. The decrease of ANNEXIN-V(+)/PI(-) expression was not shown on monocytes of patients with severe sepsis/shock where no effect of inhibitors was found. An increased presence of monocytes in the spleen combined with an increased TNF-α83production was observed in superinfected mice without differences in ANNEXIΝ-V expression compared to septic mice.Conclusions: Decrease of ANNEXIN-V binding on monocytes can be viewed as a selective response to C.albicans partly effected through activation of dectin-1. This response is down-regulated after a septic insult.

Σκοπός: Η μελέτη των διαφορών στην ενεργοποίηση των μονοκυττάρων από albicans και non-albicans είδη του γένους Candida στη σήψη.Μέθοδοι: Απομονώθηκαν μονοπύρηνα κύτταρα περιφεριού αίματος από 17 υγιείς εθελοντές και 26 ασθενείς με σοβαρή σήψη/σηπτική καταπληξία και επωαστηκάν παρουσία/απουσία τεσσάρων θερμικά αδρανοποιημένων ειδών Candida καθώς και κεκαθαρμένης β-D γλυκάνης από Candida albicans. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν παρουσία/απουσία αναστολέων ενδοκυττάριων σημάτων κυτταρικής ενεργοποίησης. Μετρήθηκαν η έκφραση της ANNEXIN-V στην κυτταρική μεμβράνη των μονοκυττάρων και λεμφοκυττάρων, η ενεργότητα της κασπάσης-3 και η κατάτμηση του DNA των μονοκυττάρων. Έλέγχθηκε επιπλέων ένα μοντέλο επιλοίμωξης από Candida albicans σε μυς με σήψη από Escherichia coli. Τα σπληνοκύτταρα των μυών διεγέρθηκαν προς παραγωγή TNF-α και μετρήθηκε έκφραση της ANNEXIN-V.Αποτελέσματα: Η έκφραση της ANNEXIN-V επί των ζώντων μονοκυττάρων των υγειών εθελοντών μειώθηκε σημαντικά μετά από επώαση με Candida albicans αλλά όχι με non-albicans ειδών. Η μείωση ήταν δόσο-εξαρτώμενη από το ενοφθάλμισμα της Candida και την συγκέντρωση της β-D γλυκάνης. Βρέθηκε συσχέτιση με την αναστολή της απόπτωσης καθώς η ενεργότητα της κασπάσης-3 και ο βαθμός κατάτμησης του DNA μειώθηκαν επίσης. Επώαση παρουσία/απουσία αναστολέων έδειξε ότι η μείωση της έκφρασης της ANNEXIN-V επαγόταν από την ενεργοποίηση του μονοπατιού του υποδοχέα dectin-1 και του παράγοντα Raf-1 από την β-D γλυκάνη. Η μείωση της έκφρασης της ΑΝΝΕΧΙΝ-V(+)/PI(-) δεν παρατηρήθηκε στα μονοκύτταρα των ασθενών με σοβαρή σήψη/σηπτική καταπληξία όπου δεν βρέθηκε καμία81επίδραση των αναστολέων. Αυξημένη κυτταροβρίθεια των μονουττάρων του σπληνός συνοδευόμενη από αυξημένη ικανότητα παραγωγής TNF-α παρατηρήθηκε στα ζωΐκά πρότυπα με επιλοίμωξη από C.albicans, χωρίς διαφορές στην έκφραση της ANNEXIN-V έναντι των σηπτικών μυών.Συμπεράσματα: Η μείωση της δέσμευσης της ANNEXIN-V επί των μονοκυττάρων παρατηρείται ως αποτέλεσμα εκλεκτικής απόκρισης στην Candida albicans και επιρεάζεται εν μέρει από την ενεργοποίηση του dectin-1. Η απόκριση αυτή καταστέλεται μετά την εγκατάσταση της σήψης.