Ανοσοϊστοχημική μελέτη της έκφρασης των εξωκυττάριων δομικών γλυκοπρωτεϊνών (Λαμινίνης, Εντακτίνης και Τενασκίνης) στα στάδια ανάπτυξης του ανθρώπινου εμβρυϊκού σπλήνα

Abstract

Aim: The splenic parenchymal microenvironment plays an important role in haematopoietic activity during the second trimester gestation, period in which extramedullary haematopoiesis takes place in the spleen of the developing foetus. Extracellular matrix (ECM) structural glycoproteins (tenascin, laminin and entactin) have been identified as part of this microenvironment by promoting haematopoietic progenitor/stem cells for further maturation, proliferation and differentiation in the final and different haematopoietic lineages. Also, ECM molecules play important roles during lymphoid tissue embryogenesis, regulating many cell functions in central and peripheral lymphoid organs such as lymphocytic differentiation, migration and activation.Chorioamnionitis is by far the most common form of placental inflammation in which, ascending infective microorganisms, usually bacteria, ascend into the uterus from the vagina producing an inflammatory reaction in the foetal membranes, umbilical cord, and ultimately within the foetus itself.The objective of the retrospective study was to determine the effects of chorioamnionitis on the ECM structural glycoporoteins (tenascin, entactin and laminin) of the developing human foetal spleen, and how these changes can influence the haematopoiesis and the development of the immune component of this organ. Our findings are correlated with the equivalents of foetuses without evidence of chorioamnionitis.Material and Methods: After elective induced pregnancy termination due to chorioamnionitis, paraffin-embedded specimens from the spleen of ninety human foetuses with their respective foetal membranes were investigated by immunohistochemical technique for the presence of ECM structural glycoproteins (tenascin-C, entactin and laminin), haematopoietic and lymphoid cells. Thirty foetuses corresponded to the 10th to 12th gestational week (end of first trimester), thirty to 16th to 24th week of gestation (second trimester) and further thirty to the 25th to 32nd gestational week (third trimester). Specimens of human foetal spleen with their respective foetal membranes from thirty cases of voluntary abortion due to other causes except for chorioamnionitis, were examined also as control subjects. Conventional histological examination of the relative foetal membranes revealing changes of acute chorioamnionitis, was performed.Results: Our results showed at the end of the first trimester of development in both of our cases (chorioamnionitis and those after voluntary abortions) no quantitative variations to the expression of the ECM glycoproteins (tenascin-C, entactin and laminin) of the foetal parenchyma. During the second and third trimester, the cases featuring changes of acute chorioamnionitis showed a decreased number of the above proteins in comparison with the control subjects checked at the same period. Regarding haematopoietic lineages, we did not find any quantitative variation, in both of our cases (chorioamnionitis and those after voluntary abortions), at the end of the first trimester. However, during the second and third trimester an increase of granulopoiesis and CD34 progenitor/stem haematopoietic cells was observed, whereas the immune system of the spleen during the third trimester demonstrated a decrease of both B and T lymphocytes, in comparison with the results of the control subjects.Conclusions: These results suggest that circulating products of bacterial growth such as toxins and cytokines, generated during chorioamnionitis, seem to influence ECM structural glycoproteins synthesis and release in the foetal splenic parenchyma by reducing them, and probably causing further disorders of haematopoiesis and lymphopoiesis.

Η έκφραση των εξωκυττάριων δομικών γλυκοπρωτεϊνών (λαμινίνης, εντακτίνης και τενασκίνης), φαίνεται πως συσχετίζεται με τα στάδια ανάπτυξης του ανθρώπινου εμβρυικού σπλήνα. Ο ερευνητικός σκοπός αυτής της εργασίας ήταν να προσδιορίσει τα αποτελέσματα της χοριοαμνιονίτιδας, που αποτελεί μία από τις σημαντικότερες αιτίες αποβολών μέχρι την 24η εβδομάδα, στη δομή και τη λειτουργία των δομικών γλυκοπρωτεϊνών του εξωκυττάριου στρώματος (Extracellular Matrix-ECM δομικές γλυκοπρωτεΐνες) στον ανθρώπινο εμβρυϊκό σπλήνα στα διάφορα στάδια ανάπτυξης. Μελετήθηκε η επίδραση των πρωτεϊνών αυτών τόσο στην διάρκεια της αιμοποίησης (2ο τρίμηνο), όσο και στην εγκατάσταση και λειτουργία του λεμφικού ιστού στο όργανο (2ο, 3ο τρίμηνο), σε σύγκριση με φυσιολογικά δείγματα ιστών σπληνών που χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες.Η έρευνα διεξήχθη σε εκατόν είκοσι (120) έμβρυα που προήλθαν από επιλεκτικά επαγόμενες (παθολογικές - κύρια αιτία αλλοιώσεις χοριοαμνιονίτιδα) και εκούσιες (μη-παθολογικές/μάρτυρες) διακοπές κύησης, για την έκφραση εξωκυττάριων δομικών γλυκοπρωτεϊνών, αιμοποιητικών και λεμφικών κυττάρων. Πραγματοποιήθηκε συμβατική ιστολογική εξέταση των αντίστοιχων εμβρυϊκών μεμβρανών.Τα αποτελέσματα μας δεν έδειξαν ποσοτικές διαφορές στην έκφραση των ECM δομικών γλυκοπρωτεϊνών (λαμινίνης, εντακτίνης και τενασκίνης), αιμοποιητικών και λεμφικών κυττάρων στο τέλος του 1ου τριμήνου στις δύο ομάδες. Στο 2ο και το 3ο τρίμηνο, παρατηρήθηκε στις περιπτώσεις σπληνών με συνοδές αλλοιώσεις χοριοαμνιονίτιδας, μείωση στον αριθμό των παραπάνω πρωτεϊνών, με μία ταυτόχρονη αύξηση της λευκής σειράς και των CD34 πρόδρομων αιμοποιητικών κυττάρων, σε σύγκριση με τους ιστούς – μάρτυρες. Στο λεμφικό ιστό του σπλήνα κατά τη διάρκεια του 3ου τριμήνου παρατηρήθηκε μείωση στον αριθμό των Β- και Τ-λεμφοκυττάρων, σε σύγκριση με τα φυσιολογικά δείγματα, ιστούς - μάρτυρες.Τα αποτελέσματα αυτά συνηγορούν ότι: 1) οι δικτυωτές ίνες σχηματίζουν το δομικό δομικό σκελετό και ότι η σύνθεση αυτών των ινών είναι σημαντική για τη μορφογένεση και λειτουργία του σπλήνα, 2) οι εξωκυττάριες γλυκοπρωτείνες λαμινίνη, εντακτίνη και τενασκίνη είναι σταθερές δομικές πρωτείνες στις δικτυωτές ίνες του ερυθρού και λευκού πολφού του σπλήνα σε όλη τη διάρκεια της εμβρυικής ανάπτυξης του οργάνου, 3) τοξίνες και κυτοκίνες που παράγονται στην διεργασία της φλεγμονής (χοριοαμνιονίτιδα), φαίνεται να επηρεάζουν στο εμβρυϊκό σπληνικό παρέγχυμα, την σύνθεση και απελευθέρωση των εξωκυττάριων δομικών γλυκοπρωτεϊνών (λαμινίνης, εντακτίνης και τενασκίνης), μειώνοντας τις, προκαλώντας προφανώς διαταραχές, τόσο στην αιμοποίηση όσο και στην εγκατάσταση και λειτουργία του λεμφικού ιστού του σπλήνα.