ΔΟΜΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ PVUII ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗΣ

Abstract

H PVUII ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΙ ΜΕΡΟΣ ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΥ ΚΑΙΤΡΟΠΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΟΥ DNA ΑΠΟ ΤΟΝ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟ PROTEUS VULGARIS. ΣΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΤΗΣ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ Η ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΔΕΙΧΝΟΝΤΑΣ ΟΤΙ Η PVUII ΕΙΝΑΙ ΜΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΜΕΓΕΘΟΥΣ 157 ΚΑΤΑΛΟΙΠΩΝ. ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΣΧΗΜΑ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΣΕ ΕΠΙΠΕΔΟ ΟΜΟΓΕΝΕΙΑΣ ΚΑΙ ΣΕ ΠΟΣΟΤΗΤΕΣ MG. ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΚΡΥΣΤΑΛΛΩΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΚΑΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣ ΤΗΣ ΣΕ ΔΙΑΚΡΙΤΙΚΟΤΗΤΑ 2.4 Α ΜΕ ΤΗΝ ΜΕΘΟΔΟ ΤΗΣ ΠΟΛΛΑΠΛΗΣ ΙΣΟΜΟΡΦΗΣ ΑΝΤΙΚΑΤΑΣΤΑΣΗΣ. ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΕΙΝΑΙ Η ΤΟΠΟΛΟΓΙΚΗ ΟΜΟΙΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΜΕ ΤΗΝ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΕCORV ΔΕΙΧΝΟΝΤΑΣ ΟΤΙ ΤΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΑ ΕΝΖΥΜΑ ΠΟΥ ΤΕΜΝΟΥΝ ΤΟ DNA ΑΦΗΝΟΝΤΑΣΤΥΦΛΑ ΑΚΡΑ ΕΜΦΑΝΙΖΟΥΝ ΔΟΜΙΚΗ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗ.

THE PVUII ENDONOUCLEASE BELONGS TO THE TYPE II BACTERIAL RESTRICTION MODIFICATION SYSTEM PVUII OF PROTEUS VULGARIS. WE DETERMINED THE SEQUENCE OF THE PVUII SYSTEM AND SUBSEQUENTLY WE DEVELOPED A PROTOCOL FOR THE PURIFICATION OF THE PROTEIN TO HOMOGENITY RESULTING IN MG QUANTITIES OF PURE PROTEIN. WE CRYSTALLIZED THE PVUII ENDONOUCLEASE AND DETRMINED THE STRUCTURE WITH THE MULTIPLE ISOMORPHOUS REPLACEMENT METHOD TO A RESOLUTION OF 2.4 A. THE RESULTED MODEL SHOWED A TOPOLOGICAL SIMILARITY WITH THE STRUCTURE OF THE ECORV ENDONOUCLEASE DESPITE THE LACK OF ANY SEQUENCE HOMOLOGY. THIS RESULT INDICATES THAT POSSIBLY RESTRICTION ENZYMES CAN BE CATEGORISED ACCORDING TO THE POSITION OF SCISSILE BOND ON DNA.