Κυκλοφορία προαποπτωτικών παραγόντων στον ορό σηπτικών ασθενών και η συσχέτιση με την επιβίωσή τους

Abstract

We hypothesized that a factor may circulate in serum early during the course of sepsis modulating apoptosis of monocytes and lymphocytes. Serum was collected from 15 healthy volunteers and from 52 patients with severe sepsis/shock within 12 hours from signs of the first failing organ. Peripheral blood mononuclear cells were isolated from 15 healthy volunteers and stimulated with collected sera. Apoptosis and expression of CD95 were determined by flow cytometry; experiments were run in the presence of caspase-8 and caspase-9 inhibitors and of CaCl2. Activity of caspase-3 was determined in cell lysates by a chromogenic kinetic assay. Stimulation with serum of patients induced apoptosis of CD4-lymphocytes and inhibited apoptosis of CD14-monocytes. Activity of caspase-3 was consistent with the latter findings. Induced apoptosis of CD4-lymphocytes was greater among non-survivors. Induced apoptosis of CD4-lymphocytes was inhibited in the presence of caspase-8 and caspase-9 inhibitors. The latter inhibitors did not modify the effect of patients’ serum on apoptosis of CD14- monocytes. CaCl2 reversed the inhibitory effect on apoptosis of CD14-moncytes. The above findings support the hypothesis for the existence of an early circulating factor in severe sepsis/shock modulating apoptosis of CD4-lymphocytes and of CD14-monocytes by interaction with the two apoptotic pathways.

Υποτέθηκε ότι κάποιος παράγοντας πιθανόν να κυκλοφορεί στον ορό κατά την διάρκεια της σήψης παίζοντας ρυθμιστικό ρόλο στην απόπτωση μονοκυττάρων και λεμφοκυττάρων. Συνελέγη ορός από 15 υγιείς εθελοντές και από 52 ασθενείς με σοβαρή σήψη/σηπτική καταπληξία εντός 12 ωρών από την εκδήλωση οργανικής ανεπάρκειας. Απομονώθηκαν μονοπύρηνα κύτταρα από 15 εθελοντές και διεγέρθηκαν με σηπτικό ορό. Μετρήθηκε η απόπτωση και η έκφραση του CD95 μέσω κυτταρομετρίας ροής. Εγιναν πειράματα και παρουσία αναστολέων κασπάσης-8 και κασπάσης-9 καθώς και παρουσία CaCl2. Προσδιορίστηκε η ενεργότητα του ενδοκυττάριου ενζύμου κασπάση-3 μέσω μίας χρωμογόνου κινητικής μεθόδου. Η επώαση των μονοπυρήνων με τον σηπτικό ορό προήγαγε την απόπτωση των λεμφοκυττάρων και ανέστειλε την απόπτωση των μονοκυττάρων. Η ενεργότητα της κασπάσης-3 ήταν σύμφωνη με τα παραπάνω αποτελέσματα. Η απόπτωση των λεμφοκυττάρων βρέθηκε να είναι υψηλότερη μεταξύ των ασθενών που κατέληξαν. Επιπλέον η απόπτωση των λεμφοκυττάρων ανεστάλη παρουσία αναστολέων κασπάσης-8 και κασπάσης-9. Οι συγκεκριμένοι αναστολείς δεν φάνηκε να επιδρούν στην απόπτωση των μονοκυττάρων. Η παρουσία του CaCl2 ανέστρεψε την ανστολή της απόπτωσης των μονοκυττάρων. Τα παραπάνω ευρήματα υποστηρίζουν την υπόθεση της παρουσίας ενός πρώιμα κυκλοφορούντα παράγοντα στον ορό των ασθενών με σοβαρή σήψη/σηπτική καταπληξία ρυθμίζοντας την απόπτωση μονοκυττάρων και λεμφοκυττάρων δρώντας μέσω και των δύο αποπτωτικών οδών, δηλαδή της ενδογενούς αλλά και της εξωγενούς οδού.