Επιδημιολογική μελέτη παραμέτρων των φλεγμονωδών κυτταροκινών και αντοχή μικροβίων σε πληθυσμούς νεανικής ακμής στον ελλαδικό χώρο

Abstract

The perception that Propionibacterium acnes may trigger expression of toll like receptors 4 (TLR4) in keratinocytes of patients with acne vulgaris has stimulated this investigation. The objective was to investigate the impact on single nucleotide polymorphisms (SNPs) of the TLR4 gene of the acne vulgaris patients. This was carried out in order to be in a better position to explain the variation of phenotypes seen in acne patients in relation to various other disorders such us the polycystic ovary syndrome (PCOS). In order to investigate the SNPs of the TLR4, the genomic DNA was isolated from 191 patients with acne vulgaris and 75 healthy controls Asp299Gly Thr399lle SNPs were defined by restriction analysis using certain endonucleases namely Hinf1 for Thr399lle polymorphism and NCO1 for Asp299Gly polymorphism of the polymerase chain reaction products. In parallel, sebum oh the lesion was cultured for the presence of P.acnes. The analysis has proved that there were not any differences in SNP allele frequencies found between patients and healthy controls. 46.5% of carriers of wild type alleles compared to 28.6% carriers of SNP alleles ( p: 0,040) were all suffering of acne conglobata. After adjusting for gender, family history of acnes, intake of any therapy and skin isolation of P.acnes, carriage of TLR4 gene SNPs was the only independent variable linked with a protective role against acne conglobata ( OR: 0.269, p: 0.014). A concurrent investigation of the levels of proinflammatory cytokines released by peripheral blood mononuclear cells namely TNF-α and IL-6 isolated from patients with acne conglobata carrying only wild- type alleles and SNP alleles showed no differences between these two groups. Considering the above results it can be safely concluded that the carriage of gene TLR4 SNPs is shown to be protective against the phenotype of acne conglobata even in the presence of P.acnes.

Η αντίληψη ότι τα στελέχη του Propionibacterium acnes μπορεί να ενεργοποιήσουν την έκφραση των υποδοχέων «toll like receptors 4» στα κερατινοκύτταρα των ασθενών με κοινή ακμή αποτέλεσε έναυσμα για τη διεξαγωγή της παρούσης μελέτης. Ο σκοπός της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η σημαντικότητα των πολυμορφισμών μονήρους νου- κλεοτιδίου (single nucleotide polymorphisms- SNPs) του γονιδίου TLR4 στους ασθενείς με κοινή ακμή. Η μελέτη διεξήχθη έτσι ώστε να μπορέσει να εξηγηθεί από μια καλύτερη σκοπιά η διαφορά στο φαινότυπο που παρατηρείται στους ασθενείς με ακμή σε σχέση με άλλες νόσους όπως είναι το σύνδρομο των πολυκυστικών ωοθηκών (Σ.Π.Ω). Για να μελετηθεί ο ρόλος των πολυμορφισμών μονήρους νουκλεοτιδίου του γονιδίου TLR4, απομονώθηκε το γενομικό DNA από 191 ασθενείς με κοινή ακμή και 75 υγιείς ανθρώ- πους που αποτέλεσαν την ομάδα αναφοράς. Οι πολυμορφισμοί στα σημεία του TLR4 γονιδίου, Asp299Gly και Thr399lle προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση περιορισμού και των προϊόντων αποκοπής του DNA με καθορισμένες ενδονουκλεάσες˙ ονομαστικά την Hinf1 για τον πολυμορφισμό Thr399lle και την CON1 για τον πολυμορ- φισμό Asp299Gly. Παράλληλα το σμήγμα από τις βλάβες της ακμής καλλιεργήθηκε για την παρουσία στελεχών του P.acnes. Η ανάλυση απέδειξε ότι δεν υπήρχε διαφορά στη συχνότητα των αλληλίων μονήρους πολυμορφισμού νουκλεοτιδίου ανάμεσα στους ασθε- νείς και την ομάδα αναφοράς. Το 46,5% των φορέων αλληλίων άγριου τύπου συγκρινό- μενο με το 28,6% των φορέων των αλληλίων μονήρους πολυμορφισμού νουκλεοτιδίου (p: 0.0040) υπέφεραν όλοι από τη συρρέουσα και κυστική μορφή της ακμής λατινιστί acne conglobata. Προσαρμόζοντας για το γένος των ασθενών, το οικογενειακό ιστορικό ακμής, τη λήψη οιασδήποτε θεραπείας και την απομόνωση των στελεχών του P.acnes από το δέρμα των ασθενών, η φορεία των πολυμορφισμών μονήρους νουκλεοτιδίου στο γονίδιο TLR4 ήταν ο μόνος ανεξάρτητος μεταβλητός παράγων που συνδεόταν με τον προστατευτικό ρόλο ενάντια στη μορφή της συρρέουσας κυστικής ακμής (OR: 0.269, p: 0.014). Η παράλληλη διερεύνηση των κυτταροκινών που απελευθερώνονται προ της φλεγμονής από τα περιφερικά μονοκύτταρα του αίματος ονομαστικά TNF-α και IL-6 τα οποία απομονώθηκαν από τους ασθενείς με συρρέουσα μορφή ακμής με φορεία αλλη- λίων άγριου τύπου και πολυμορφισμούς μονήρους νουκλεοτιδίου δεν έδειξαν καμία δια- φορά ανάμεσα στις δυο ομάδες των ασθενών. Επίσης καμία διαφορά στα επίπεδα των ιδίων κυτταροκινών δεν σημειώθηκε ανάμεσα στις ασθενείς που είχαν σύνδρομο πολυ- κυστικών ωοθηκών, ανάμεσα στις ασθενείς που φέρουν αλλήλια άγριου τύπου και στις ασθενείς με πολυμορφισμούς μονήρους νουκλεοτιδίου στο γονίδιο TLR4. Λαμβάνοντας 74 υπ’ όψιν τα άνωθεν αποτελέσματα μπορεί να λεχθεί ευκόλως συμπερασματικά ότι η φορεία των πολυμορφισμών μονήρους νουκλεοτιδίου είναι προστατευτική έναντι του φαινοτύπου της συρρέουσας κυστικής μορφής ακμής (acne conglobata) ακόμα και υπό την παρουσία των στελεχών του P.acnes