Διερεύνηση της αντιαγγειογενετικής δράσης του μονοξειδίου του αζώτου

Abstract

The role of nitric oxide in angiogenesis is during the last decade an object of research and disagreement between several research groups. In the present study, in order to further clarify the effect of nitric oxide in the angiogenic process, two approaches have been used: A) We studied the effect of exogenous NO, deriving from the NO donor SNP, in cultures of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), as concerns the DNA synthesis and KDR expression, two of the obligatory and necessary steps for the new vessel formation. We found that exogenous NO causes significant down regulation in DNA synthesis a B). In the in vivo system of CAM, we studied NO production, NOS activity and iNOS expression between 8th and 13th day of chick embryo development. We found that release of nitrite, NOS activity and iNOS expression, are increasing from day 8 until day 12 of embryo development, and at 13th day decrease, following in this way the progress of angiogenesis with a subtle delay. Furthermore, with the use of LPS we found a dose-dependent inhibition of angiogenesis in CAM that was reversed with the iNOS inhibitor L-NAME. All these data, lead to the conclusion that at least in the chick chorioallantoic membrane, NO acts as a down-regulation mechanism of angiogenesis.

Ο ρόλος του μονοξειδίου του αζώτου στην αγγειογένεση αποτελεί την τελευταία δεκαετία αντικείμενο διερεύνησης και διαφωνίας μεταξύ διαφόρων ερευνητικών ομάδων. Στην παρούσα εργασία, προκειμένου να διερευνηθεί περαιτέρω η δράση του μονοξειδίου του αζώτου στην αγγειογενετική διαδικασία χρησιμοποιήθηκαν δυο προσεγγίσεις: Α) Καλλιέργειες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων από ομφάλια φλέβα (HUVECs) στα οποία χορηγήθηκε NO εξωγενώς από τον δότη NO, νιτροπρωσσικό νάτριο (SNP) και μελετήθηκε ο ρυθμός σύνθεσης του DNA και η έκφραση του KDR, δύο από τα απαραίτητα και αναγκαία βήματα για το σχηματισμό νέων αγγείων. Βρέθηκε ότι το εξωγενώς χορηγούμενο NO προκαλεί μεγάλη μείωση της σύνθεσης του DNA και της έκφρασης του KDR, τόσο σε ήρεμα όσο και σε διεγερμένα με VEGF ενδοθηλιακά κύτταρα. Β) Το in vivo σύστημα της CAM, στο οποίο μελετήθηκε η παραγωγή NO, η ενεργότητα της NOS και η έκφραση της iNOS από την 8η έως και την 13η ημέρα ανάπτυξης του εμβρύου. Βρέθηκε ότι η έκλυση των νιτρωδών ανιόντων, η ενεργότητα της NOS και η έκφραση της iNOS αυξάνονται από την 8η έως και την 12η η ημέρα και μειώνονται την 13η, ακολουθώντας την πρόοδο της αγγειογένεσης με μικρή καθυστέρηση. Επιπλέον με την χρήση LPS δείχθηκε δοσοεξαρτώμενη μείωση της ΒΚΠ στην CAM, που αντιστράφηκε με τη χρήση του αναστολέα L-NAME. Τα δεδομένα οδηγούν στο συμπέρασμα ότι τουλάχιστον στην CAM, το NO δρα ως ανασχετικός μηχανισμός στην αγγειογένεση.