ΕΠΑΓΩΓΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΣΤΑΣΗΣ ΤΩΝ ΘΗΛΑΣΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΠΡΟΣ ΤΟΥΣ ΑΛΚΥΛΙΩΤΙΚΟΥΣ ΠΑΡΑΓΟΝΤΕΣ ΚΑΙ ΕΠΙΔΙΟΡΘΩΣΗ ΤΗΣ ΒΛΑΒΗΣ 06-ΑΛΚΥΛΟ-ΓΟΥΑΝΙΝΗΣ

Abstract

THE PRESENT STUDY FOCUSED IN THE INVESTIGATION OF EUKARYOTIC CELL ADAPTIVE PHENOMENON TO THE GENOTOXIC AND CYTOTOXIC EFFECTS OF ALKYLATING AGENTS, AS WELL AS IN THE HUMAN METHYLTRANSFERASE (MGMT) GENE EXPRESSION IN CHINESE HAMSTER OVARY (CHO) CELLS. IT WAS FOUND THAT PRETREATMENT OF CELLS WITH VERY LOW DOSES OF ALKYLATING AGENTS, PROTECTED THE CHO CELLS BY DECREASING THE SISTER CHROMATID EXCHANGES (SCES) INDUCED BY A HIGH DOSE ALKYLATING TREATMENT. IN CONTRAST WITH THE SCES, THE CHO CELLS WHEN TESTED FOR MUTAGENICITY AND CYTOTOXICITY DID NOT SHOW ANY INCREASED RESISTA UNDER THE SAME PRETREATMENT CONDITIONS. THE CHO ENDOGENOUS MGMT REPAIR PROTEIN DID NOT SEEM TO BE INVOLVED IN THE INCREASED CELL RESISTANCE TO THE SCES, AS INDICATED BY PROTEIN ACTIVITY MEASUREMENTS. HUMAN STOMACH DNA WITH HIGH LEVELS OF MGMT ACTIVITY WAS TRANSFECTED TO CHO CELLS AND THE CELLSWERE SUBSEQUENTLY SELECTED WITH THE ALKYLATING CROSS-LINKING AGENT CARMUSTINE (BCNU). IT SHOULD BE POINTED OUT THAT THE FREQUENCY OF THE BCNU- RESISTANT CLONES WITH EXOGENOUS HUMAN DNA WAS SIGNIFICANTLY HIGHER THAN THE MOCK TRANSFECTED.HOWEVER, ONLY 10% OF THE CLONES SHOWED INCREASED LEVELS OF MGMT ACTIVITY (REGARDLESS OF HUMAN DNA INTEGRATIONS). DOSE-RESPONSE CURVES OF ISOLATED BCNU-RESISTANT CLONES AGAINST BCNU TOXICITY, ENSURED THE PROTECTIVE EFFECT OF MGMT REPAIR ENZYME, AND SUGGESTED A ROLE FOR ADDITIONAL PROTECTIVE MECHANISMS. THE BCNU-RESISTANT CLONES WITH INCREASED MGMT ACTIVITY WERE PROVED TO BE MORE RESISTANT TO THE MUTAGENIC EFFECT OF MNNG, ALTHOUGH CROSS-REACTIVITY WITH THE MNGG CYTOTOXICITY WAS NOT DEMONSTRATED.

Η ΠΑΡΟΥΣΑ ΜΕΛΕΤΗ ΕΣΤΙΑΣΕ ΣΤΗΝ ΕΡΕΥΝΑ ΕΝΟΣ ΦΑΙΝΟΜΕΝΟΥ ΠΡΟΣΑΡΜΟΓΗΣ ΚΑΙ ΑΝΤΙΣΤΑΣΗΣΤΟΥ ΕΥΚΑΡΥΟΤΙΚΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ ΣΤΙΣ ΓΕΝΟΤΟΞΙΚΕΣ ΚΑΙ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΕΣ ΕΠΙΔΡΑΣΕΙΣ ΤΩΝ ΑΛΚΥΛΙΩΤΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΣΤΗΝ ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ΜΕΘΥΛΟΤΡΑΝΣΦΕΡΑΣΗΣ ΣΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΚΙΝΕΖΙΚΟΥ ΧΟΙΡΙΔΙΟΥ (CHO). ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ Η ΠΡΟΗΓΟΥΜΕΝΗΧΟΡΗΓΗΣΗ ΣΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΠΟΛΥ ΧΑΜΗΛΩΝ ΔΟΣΕΩΝ ΑΛΚΥΛΙΩΤΙΚΟΥ ΠΡΟΣΤΑΤΕΨΕ ΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ, ΜΕΙΩΝΟΝΤΑΣ ΣΤΑΔΙΑΚΑ ΤΙΣ ΑΝΤΑΛΛΑΓΕΣ ΑΔΕΛΦΩΝ ΧΡΩΜΑΤΙΔΙΩΝ (SCES), ΠΟΥ ΠΡΟΚΑΛΕΣΕ ΜΙΑΥΨΗΛΗ ΔΟΣΗ ΑΛΚΥΛΙΩΤΙΚΟΥ. ΑΝΤΙΘΕΤΑ ΜΕ ΤΑ SCES, ΤΑ CHO ΚΥΤΤΑΡΑ ΔΕΝ ΕΓΙΝΑΝ ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΟ ΑΝΘΕΚΤΙΚΑ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΙΣ ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΤΗΝ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑ, ΟΤΑΝ ΕΞΕΤΑΣΤΗΚΑΝ ΣΤΙΣ ΙΔΙΕΣ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ. ΤΟ ΕΠΙΔΙΟΡΘΩΤΙΚΟ ΕΝΖΥΜΟ ΜΕΘΥΛΟΤΡΑΝΣΦΕΡΑΣΗ (MGMT) ΔΕΝ ΦΑΝΗΚΕ ΝΑ ΣΧΕΤΙΖΕΤΑΙ ΜΕ ΤΗΝ ΑΥΞΗΜΕΝΗ ΑΝΤΙΣΤΑΣΗ ΤΩΝ CHO ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΤΑ SCES, ΣΥΜΦΩΝΑ ΜΕ ΤΙΣ ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΕΝΥΖΜΙΚΗΣ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΠΟΥ ΕΓΙΝΑΝ. ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ DNA ΣΤΟΜΑΧΟΥ-ΙΣΤΟΣ ΜΕ ΥΨΗΛΑ ΕΠΙΠΕΔΑ MGMT- ΕΙΣΗΧΘΗ ΣΕ CHO ΚΥΤΤΑΡΑ, ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΚΑΤΟΠΙΝ ΕΠΕΛΕΓΗΣΑΝ ΜΕ ΤΟΝ ΑΛΚΥΛΙΩΤΙΚΟ ΣΥΝΔΕΤΙΚΟ ΠΑΡΑΓΟΝΤΑ (ΚΥΤΤΑΡΟΣΤΑΤΙΚΟ ΦΑΡΜΑΚΟ) ΚΑΡΜΟΥΣΤΙΝΗ (BCNU). ΣΗΜΕΙΩΝΕΤΑΙ ΟΤΙ Η ΣΥΧΝΟΤΗΤΑ ΕΜΦΑΝΙΣΗΣ BCNU - ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ ΚΛΩΝΩΝ ΜΕ ΕΞΩΓΕΝΕΣ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ DNA - ΗΤΑΝ ΣΗΜΑΝΤΙΚΑ ΥΨΗΛΟΤΕΡΗ ΑΠΟ ΑΥΤΗΝ ΤΩΝ ΚΛΩΝΩΝ ΧΩΡΙΣ DNA. ΕΝ ΤΟΥΤΟΙΣ, ΜΟΝΟΝ ΤΟ 10% ΤΩΝ ΚΛΩΝΩΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΑΝ ΑΥΞΗΜΕΝΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ MGMT (ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΕ ΑΝΕΞΑΡΤΗΣΙΑ ΑΠΟ ΕΝΣΩΜΑΤΩΣΗ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ DNA). ΚΑΜΠΥΛΕΣ ΒΙΩΣΙΜΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ BCNU - ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ ΚΛΩΝΩΝ ΠΟΥ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ ΕΝΑΝΤΙΑ ΣΤΟ ΙΔΙΟ ΤΟ BCNU - ΕΝΙΣΧΥΣΑΝ ΤΟΝ ΠΡΟΣΤΑΤΕΥΤΙΚΟ ΧΑΡΑΚΤΗΡΑ ΤΟΥ ΕΠΙΔΙΟΡΘΩΤΙΚΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ MGMT ΚΑΙΠΡΟΤΕΙΝΑΝ ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ ΚΑΙ ΑΛΛΩΝ ΜΗΧΑΝΙΣΜΩΝ ΠΡΟΣΤΑΣΙΑΣ. ΟΙ BCNU - ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΙ ΚΛΩΝΟΙ ΜΕ ΑΥΞΗΜΕΝΟ MGMT ΕΝΖΥΜΟ ΦΑΝΗΚΑΝ ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΟ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΙ ΣΤΗΝ ΠΡΟΚΛΗΣΗ ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΩΝ ΑΠΟ ΤΗΝ Ν-ΜΕΘΥΛΟ -Ν-ΝΙΤΡΟ-Ν- ΝΙΤΡ (MNNG), ΑΝ ΚΑΙ ΔΕΝ ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΕ ΑΝΑΛΟΓΟΦΑΙΝΟΜΕΝΟ ΟΤΑΝ ΕΞΕΤΑΣΘΗΚΕ Η ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑ ΤΩΝ BCNU ΚΛΩΝΩΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΟ MNNG.