Ταυτοποίηση πολυμορφισμών των υποδοχέων της λιπονεκτίνης και συσχέτιση με την παρουσία στεφανιαίας νόσου και ινσουλινοαντοχής

Abstract

Adiponectin is a hormone secreted by adipose tissue. To this date 2 adiponectin receptors are been discovered, named ADIPOR1 and ADIPOR2. AIM The aim of this thesis is the investigation of a possible association between eight single nucleotide polymorphisms (SNPs) of ADIPOR2 and one single nucleotide polymorphism of ADIPOR1 with coronary artery disease and insulin-resistance. METHODS We studied 70 individuals with age 45-70 years. We divided our sample in two groups. Group A had individuals with diagnosed coronary artery disease while in group B with no coronary artery disease. Also we made subgroups according to the status of insulin tolerance. All subjects underwent coronary angiography and exercise treadmill test. Carotid Intima-Media Thickness (IMT) as index of aterosclerosis and Flow Mediated Dilatation (FMD) of the brachial artery as index of endothelial disfunction were calculated. All subjects underwent oral glucose tolerance test. HOMA and Matsuda index were calculated. The genetic analysis of the polymorphisms was performed using two techniques: real time PCR with hybridization probes and Allele Specific Primer Extension (ASPE) with microspheres. For the statistical analysis of the data we used SPSS for Windows. RESULTS-DISCUSSION There was a statistically significant difference in the distribution of alleles of rs767870 G/A from ADIPOR2 gene between group A and group B (p=0.013). AG heterozygotes of the same polymorphism had significantly lower FMD compared with AA homozygotes (p=0.046). Polymorphism rs767870 G/A of ADIPOR2 can be associated with coronary artery disease and insulin resistance as we saw in the different allelic distribution and the association of low FMD with heterozygotes. It is possible to use this polymorphism as a genetic marker for early diagnosis of cardiovascular disease.

Η λιπονεκτίνη ή αλλιώς αντιπονεκτίνη είναι μια ορμόνη που εκκρίνεται απο τον λιπώδη ιστό. Μέχρι σήμερα έχουν εντοπιστεί δύο υποδοχείς για την λιπονεκτίνη. Τα δύο γονίδια που κωδικοποιούν την έκφραση των υποδοχέων ονομάστηκαν ADIPOR1 και ADIPOR2. ΣΤΟΧΟΣ Στόχος της παρούσας διατριβής είναι η διερεύνηση συσχέτισης οκτώ πολυμορφισμών του γονιδίου που κωδικοποιεί την έκφραση του υποδοχέα της λιπονεκτίνης ADIPOR2 και ενός πολυμορφισμού του γονιδίου που κωδικοποιεί την έκφραση του υποδοχέα της λιπονεκτίνης ADIPOR1 με την παρουσία Στεφανιαίας Νόσου και ινσουλινοαντοχής. ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ Η μελέτη έγινε σε 70 εθελοντές, άνδρες και γυναίκες ηλικίας 45-70 ετών. Η πρώτη ομάδα (ομάδα Α) περιλάμβανε 42 ασθενείς με βεβαιωμένη Στεφανιαία Νόσο, ενώ η δεύτερη ομάδα (ομάδα Β) περιλάμβανε 28 άτομα χωρίς Στεφανιαία Νόσο. Xωρίσαμε τα άτομα των δύο ομάδων σε υποομάδες ανάλογα με την κατάσταση ανοχής τους στη γλυκόζη. Οι εθελοντές υποβλήθηκαν σε στεφανιογραφία, σε δοκιμασία κόπωσης και σε από του στόματος δοκιμασία ανοχής στη γλυκόζη. Ως δείκτης αθηρωμάτωσης υπολογίστηκε το ΙΜΤ και ως δείκτης ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας το FMD. Υπολογίστηκαν ο δείκτης ινσουλινοευαισθησίας Matsuda καθώς και ο δείκτης ινσουλινοαντίστασης HOMA. Για τη γονοτυπική ανάλυση των πολυμορφισμών χρησιμοποιήσαμε δύο τεχνικές, την τεχνική της αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) με χρήση φθοριζόντων ιχνηλατών και την τεχνική πολλαπλής ανίχνευσης αλληλίων με επέκταση εκκινητών (ASPE) ειδικών για τα αλλήλια. Η ανάλυση των δεδομένων έγινε με τη χρήση του στατιστικού πακέτου SPSS for Windows. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ-ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Παρατηρήσαμε ότι ο πολυμορφισμός rs767870 G/A του γονιδίου ADIPOR2 παρουσίασε στατιστικά σημαντική διαφορά στη κατανομή των αλληλίων μεταξύ των δύο ομάδων (p=0.013). Επιπλέον, για όλα τα άτομα της μελέτης, οι ετεροζυγώτες ΑG έχουν στατιστικά σημαντικά μικρότερη τιμή του FMD απο τους ομοζυγώτες ΑΑ (p=0.046). Επειδή κατά τα ευρήματα της μελέτης ο πολυμορφισμός rs767870 G/A συνδέεται με την παρουσία Στεφανιαίας Νόσου, πιθανό να μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως γενετικός δείκτης για έγκαιρη διάγνωση ατόμων με προδιάθεση να αναπτύξουν στεφανιαία νόσο