ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΩΝ ΑΝΑΒΙΩΜΕΝΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ ΤΟΥ ΤΑΥΡΟΥ ΜΕ ΥΑΛΟΥΡΟΝΙΚΟ ΟΞΥ

Abstract

ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΠΑΡΟΥΣΑΣ ΜΕΛΕΤΗΣ ΗΤΑΝ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΠΙΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΥΑΛΟΥΡΟΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΣΤΗΝ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΑΝΑΒΙΩΜΕΝΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ ΤΟΥ ΤΑΥΡΟΥ. Η ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ ΕΚΤΙΜΗΘΗΚΕ ΕΜΜΕΣΑ ΩΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΑΚΡΟΣΩΜΑΤΟΣ (ΑΥΤΟΜΑΤΗ-ΠΡΟΚΑΛΟΥΜΕΝΗ) ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΩΣ ΠΟΣΟΣΤΟ ΕΞΩΣΩΜΑΤΙΚΗΣ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ. ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΕΝΑ (SWIM - UP) ΑΝΑΒΙΩΜΕΝΑ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΑ ΤΟΥ ΙΔΙΟΥ ΕΚΣΠΕΡΜΑΤΙΣΜΑΤΟΣ ΕΝΟΣ ΠΡΟΕΠΙΛΕΓΜΕΝΟΥ ΤΑΥΡΟΥ. ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΑΚΡΟΣΩΜΑΤΟΣ ΤΑ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΑ ΕΚΤΕΘΗΚΑΝ ΣΕ S-TALP ΜΟ ΝΟ Η ΜΕ ΗΠΑΡΙΝΗ (1ΜG/ML) Η ΜΕ ΥΑΛΟΥΡΟΝΙΚΟ ΟΞΥ (Y.O., 1ΜG/ML, 5ΜG /ML ΚΑΙ 10ΜG/ML) ΚΑΙ ΕΠΩΑΣΤΗΚΑΝ ΓΙΑ 0H, 15MIN, 4H, 8H, 12H ΚΑΙ 24H. ΣΤΟ ΤΕΛΟΣ ΤΗΣ ΕΠΩΑΣΗΣ ΓΙΝΟΤΑΝ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΗΣ ΚΙΝΗΤΙΚΟΤΗΤΑΣ, ΤΗΣ ΖΩΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΚΑΙΤΗΣ ΚΑΤΑΣΤΑΣΗΣ ΤΟΥ ΑΚΡΟΣΩΜΑΤΟΣ ΤΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙ ΩΝ ΤΟΣΟ ΠΡΙΝ ΟΣΟ ΚΑΙ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΕΚΘΕΣΗ ΤΟΥΣ ΣΕ ΛΥΣΟΦΩΣΦΑΤΙΔΥΛΟΧΟΛΙΝΗ (LPC, 50ΜG/ML) ΓΙΑ 15MIN. ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΚΤΙΜΗΣΗ ΤΟΥ ΠΟΣΟΣΤΟΥ ΕΞΩΣΩΜΑΤΙΚΗΣ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ ΓΙΝΟΤΑΝ ΣΥΓΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ ΜΕ ΩΡΙΜΑ ΩΑΡΙΑ ΣΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ F-TALP ΜΟΝΟ Η ΜΕ ΗΠΑΡΙΝΗ (1ΜG /ML) Η ΜΕ ΥΟ (1 ΜG/ML, 5 ΜG/ML ΚΑΙ 10ΜG/ML) ΓΙΑ 16 Η ΓΙΑ 24H. Η ΕΚΤΙΜΗΣΗ ΤΗΣ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ ΓΙΝΟΤΑΝ ΑΜΕΣΑ ΣΤΟ ΤΕΛΟΣ ΤΗΣ 16ΩΡΗΣ ΣΥΓΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΕΝΩ ΣΤΗ ΔΕΥΤΕΡΗ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΩΝ ΕΜΒΡΥΩΝ ΓΙΑ 48H. ΤΟ ΥΑΛΟΥΡΟΝΙΚΟ ΟΞΥ ΠΡΟΚΑΛΕΙ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΑΝ ΑΒΙΩΜΕΝΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ. H ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΑΥΤΗ ΕΞΑΡΤΑΤΑΙ ΤΟΣΟ ΑΠΟ ΤΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΜΕΝΗ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ ΤΟΥ ΟΣΟ ΚΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ΧΡΟΝΟ ΕΚΘΕΣΗΣ ΤΩΝ ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ. Η ΗΠΑΡΙΝΗ ΥΠΕΡΕΙΧΕ ΣΤΗΝ ΠΡΟΚΛΗΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ ΑΚΡΟΣΩΜΑΤΟΣ, ΟΧΙ ΟΜΩΣ ΚΑΙ ΣΤΗΝ ΕΠΙΤΕΥΞΗ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ. ΤΑ ΘΕ ΤΙΚΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΑΝ ΣΤΙΣ ΜΕΤΑΧΕΙΡΙΣΕΙΣ ΤΗΣ ΗΠΑΡΙΝΗΣ

THE AIM OF THIS STUDY WAS TO DETERMINE WHETHER HYALURONIC ACID INFLUENCES CAPACITATION OF FROZEN-THAWED BOVINE SPERMATOZOA. CAPACITATION WAS EVALUATED BY DETERMINING THE ABILITY OF SPERMATOZOA TO FERTILIZE BOVINE OOCYTES IN VITRO AND TO UNDERGO TRUE ACROSO ME REACTION (BOTH SPONTANEOUS AND INDUCED). SWIM-UP SEPARATED SPERMATOZOA FROM ONE LOT OF FROZEN-THAWED SEMEN FROM A HIGHLY FERTILE BULL WERE EITHER INCUBATED IN VITRO AND ASSESSED FOR ACROSOME REACTIONS OR USED IN AN IN VITRO FERTILIZATION SYSTEM. SPERMAT OZOA USED IN ACROSOME REACTIONASSESSMENT WERE TREATED WITH EITHER S-TALP ONLY OR WITH HEPARIN (1 ΜG/ML) OR HYALURONIC ACID (HA, 1ΜG/ML, 5 ΜG/ML AND 10 ΜG/ML) FOR 0H, 15 MIN. 4H, 8H, 12HAND 24H. SPERM MOTILITY, VIABILITY AND ACROSOMAL STATUS WERE EXAMINED AT THE END OF THE INCUBATION PERIOD BOTH BEFORE AND AFTER SPERMATOZOA WERE INCUBATED WITH LYSOPHOSPHATIDYLCHOLINE (50 ΜG/ML) FOR 15 MIN. IN VITRO FERTILIZATION WAS PERFORMED BY INCUBATING IN VITRO MATURED CUMULUS OOCITE COMPLEXES WITH SPERMATOZOA IN EITHE R F-TALP ONLY OR WITH HEPARIN (H, 1ΜG/ML) OR HYALURONIC ACID(HA, 1ΜG/ML, 5ΜG/ML AND 10ΜG/ML) FOR EITHER 16 H OR 24 H. IN VITRO FERTILIZATION ASSESSMENT WAS PERFORMED EITHER AT THE END OF CO-COLTURE (16 H CO-INCUBATION), OR AFTER AN ADDITIONAL CULTURE OF PRESUMPTIVE ZYGOTES FOR 48 H (24 H CO-INCUBATION). HYALURONIC ACID HAS THE ABILITY TO INDUCE CAPACITATION TO FROZEN-THAWED BOVINE SPERM. THIS ABILITY IS DEPENDENT ON BOTH CONCENTRATION AND DURATION OF TREATMENT. IN TERMS OF ACROSOME REACTION, HEPARIN HAD A DIRECT EFFECTAND PRESERVED HIGHER VALUES THAN THE OTHER TREATMENTS.(ABS