ΜΕΛΕΤΗ ΝΟΥΚΛΕΟΛΥΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΣΕ ΠΥΡΗΝΕΣ ΕΓΚΕΦΑΛΟΥ ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ

Abstract

FRACTIONAL EXTRACTION OF RABBIT BRAIN NUCLEI WITH VARIOUS CONCENTRATIONS OF NACL RESULTS IN PARTIAL SEPERATION OF DEOXYRIBONUCLEOLYTIC ENZYMES.TREATMENT WITH0,2 M NACL LEADS TO THE EXTRACTION OF THE MAIN PART OF ACIDIC ACTIVITY .A GREAT NUMBER OF N-GLYCO SYLATED ACIDIC ENZYME FORMS WITH VARIOUS M.W. CONTRIBUTE TO THIS ACTIVITY .THEY ARE METAL INDEPENDENT OR SLIGHTLY DEPENDENT ENZYMESAND ARE EXTREELY SENSITIVE WHEN PURIFIED .THE FRACTION 0,2-0,65 M NACL .IT CONSISTS OF A SINGLE SUBUNIT OF 50,1 KDA .IT ACT S ON SSDNA OR RNA AT PH 10,5.IT IS A 3' ENDODEOXYRIBONUCLEASE HYDROLIZING NPA , NPT BONDS .ADDITION OF DSDNA OR RNA INHIBITS ENZYME ACTIVITY DUE TO COMPLEX FORMATION .SIMILAR ACTIVITIES WERE ALSO DETECTED IN OTHER TISSUES .A SMALL PART OF THE ALKALINE DEO XYRIBONUCLEOTIC ACTIVITY REMAINED ATTACHED TO CHROMATIN AFTER TREATMENT WITH 0,65 M NACL .THE ACTIVITY WAS EXTRACTED AND PURIFIED .THE ENZYME CONSISTS OF ONE SUBUNIT OF 43 KDA HYDROLISING CPT BONDS.WHEN USING RNA AS SUBSTRATE IT HYDROLYSES NPA BONDS .FOLL OWING DEPHOSPHORYLATION THE ENZYME INCREASES ITS ACTIVITY AND LOSES ITS SPECIFITY .THE DEPHOSPHORYLATED ENZYME IS ATTACHED TO HEPARINE -SEPHAROSE STRONGER THAN THE NON DEPHOSPHORYLATED ENZYME AND INTERACTS WITH ANTIBODIES RAISED AGAINST THE NON DEPHOSPHOR YLATED FORM.THE ENZYME WAS DETECTED BY IMMUNOBLOTTING ONLY IN BRAIN TISSUE EXTRACTS.

ΟΙ ΔΕΟΞΕΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΛΥΤΙΚΕΣ ΔΡΑΣΕΙΣ ΤΩΝ ΠΥΡΗΝΩΝ ΕΓΚΕΦΑΛΟΥ ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ ΚΛΑΣΜΑΤΩΘΗΚΑΝ ΑΡΧΙΚΑ ΜΕ ΕΚΧΥΛΙΣΗ ΤΩΝ ΠΥΡΗΝΩΝ ΜΕ ΔΙΑΦΟΡΕΣ ΣΥΝΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ NA CL .ΤΟ ΚΛΑΣΜΑ0,2 Μ ΝΑCL ΠΕΡΙΕΙΧΕ ΤΟ ΚΥΡΙΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΟΞΙΝΗΣ ΔΡΑΣΗΣ .Η ΟΞΙΝΗ ΔΡΑΣΗ ΤΩΝ ΠΥΡΗΝΩΝ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΕ ΜΕΓΑΛΟ ΑΡΙΘΜΟ Ν-ΓΛΛΘΚΟΣΥΛΙΩΜΕΝΝ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΜΟΡΦΩΝ ΠΟΥ ΚΑΤΑΝΕΜΟΝΤΑΙ ΣΕ ΜΕΓΑΛΟ ΕΥΡΟΣ ΜΟΡΙΑΚΩΝ ΒΑΡΩΝ , ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΥΝ ΜΙΚΡΗ Η ΚΑΘΟΛΟΥ ΕΞΑΡΤΗΣΗ ΑΠΟΜΕΤΑΛΛΑ ΚΑΙ ΕΙΝΑΙ ΑΣΤΑΘΗ ΣΕ ΚΑΘΑΡΗ ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ .ΤΟ ΚΛΑΣΜΑ 0,2-0,65 M NACL ΠΕΡΙΕΙΧΕ ΟΞΙΝΕΣ ΟΥΔΕΤΕΡΕΣ ΚΑΙ ΑΛΚΑΛΙΚΕΣ ΔΡΑΣΕΙΣ ΣΕ ΜΟΡΦΗ ΕΝΕΡΓΩΝ Η ΑΝΕΝΕΡΓΩΝ ΣΜΠΛΟΚΩΝ ΜΕ ΝΟΥΚΛΕΙΝΙΚΑ ΟΞΕΑ .ΑΚΟΛΟΥΘΗΣΕ ΜΕΡΙΚΟΣ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΜΙΑΣ CA2+ - ΕΞΑΡΤΩΜΕΝΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΚΛΑΣΜΑΤΟΣ 0,2-0,65 0,2-0,65 M NACL ΠΟΥ ΒΡΙΣΚΕΤΑΙ ΑΡΧΙΚΑ ΣΕ ΜΟΡΦΗ ΑΝΕΝΕΡΓΟΥ ΣΥΜΠΛΟΚΟΥ .ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΜΙΑ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ ΤΩΝ 50,1 ΚΑ, ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΑΠΟΚΛΕΙΣΤΙΚΑ ΜΟΝΟΚΛΩΝΟ DNA ΜΕ ΒΕΛΤΙΣΤΗ ΔΡΑΣΗ ΣΕ PH 10.5 , ΕΙΝΑΙ 3' ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΚΑΙ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΣΗ ΣΕ ΔΕΣΜΟΥΣ ΝPA ,NPT.ΠΡΟΣΘΗΚΗ DSDNA Η RNA ΠΡΟΚΑΛΕΙ ΑΝΑΣΤΟΛΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΜΕ ΕΠΑΝΕΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΤΟΥ ΑΡΧΙΚΟΥ ΣΥΜΠΛΟΚΟΥ .ΑΝΑΛΟΓΗ ΔΡΑΣΗ ΑΝΙΧΝΕΥΤΙΚΕ ΚΑΙ ΣΕ ΑΛΛΟΥΣ ΙΣΤΟΥΣ .ΜΙΚΡΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΑΛΚΑΛΙΚΗΣ ΔΡΑΣΗΣΠΑΡΕΜΕΙΝΕ ΣΤΗ ΧΡΩΜΑΤΙΝΗ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΕΚΧΥΛΙΣΗ ΜΕ 0,65 M NACL.Η ΔΡΑΣΗ ΕΚΧΥΛΙΣΤΗΚΕΚΑΙ ΚΑΘΑΡΙΣΤΗΚΕ .ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΜΙΑ ΥΠΟΜΟΑΔΑ ΤΩΝ 43 ΚDA , ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΜΟΝΟΚΛΩΝΟ DNA ΚΑΙ RNA ΠΑΡΟΥΣΙΑ MG+ Η MN+ ΣΕ PH 8,25.ΔΡΑ ΣΑΝ 5' ΕΝΟΔΕΟΞΥΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΜΕ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΣΗ ΣΕ CPT ΔΕΣΜΟΥΣ .ΜΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ RNA ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΑΞΕΙΔΙΚΕΥΣΗ ΣΕ NPA ΔΕΣΜΟΥΣ .ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΜΕ ΑΠΟΦΩΣΦΟΡΥΛΥΩΣΗ ΜΕ ΤΑΤΟΧΡΟΝΗ ΑΠΩΛΕΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΣΗΣ .ΤΟ ΑΠΟΦΩΣΦΟΡΥΛΙΩΜΕΝΟ ΕΝΖΥΜΟ ΣΥΓΚΡΑΤΕΙΤΑΙ ΙΣΧΥΡΟΤΕΡΑ ΣΕ ΣΤΗΛΗ ΗΠΑΡΙΝΗΣ -ΣΕΦΑΡΟΖΗΣ ΕΝΩ (ΑΠΟΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ).