ΜΕΛΕΤΗ ΕΣΤΕΡΟΛΥΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΕ ΘΗΛΑΣΤΙΚΑ

Abstract

ΣΤΗ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΑΥΤΗ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ ΜΕΧΡΙ ΟΜΟΙΟΓΕΝΕΙΑΣ ΔΥΟ ΜΟΡΦΕΣ ΥΔΡΟΛΑΣΗΣ ΚΑΡΒΟΞΥΛΙΚΩΝ ΕΣΤΕΡΩΝ ΑΠΟ ΠΑΓΚΡΕΑΣ ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ , Η ΔΟΕ - ΜΟΡΦΗ ΜΕ Μ.Σ. 59 ΚΔΑ ΚΑΙ ΡΙ6,04 ΚΑΙ Η ΤΕ-ΜΟΡΦΗ ΜΕ Μ.Σ. 61 ΚΔΑ ΚΑΙ ΡΙ 6,40.ΟΙ ΚΜ ΤΩΝ ΔΥΟ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΜΟΡΦΩΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΑΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΟΞΙΚΟ ΕΣΤΕΡΑ ΤΗΣ Π-ΝΙΤΡΟΦΑΙΝΟΛΗΣ ΣΕ 0,385ΜΜ ΔΟΨ -ΜΟΡΦΗΚΑΙ 1,315ΜΜ ΓΙΑ ΤΗΝ Τ-ΜΟΡΦΗ .ΥΨΗΛΟΤΕΡΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΓΙΑ ΤΙΣ ΔΥΟ ΕΝΖΥΜΙΚΕΣ ΜΟΡΦΕΣ ΕΜΦΑΝΙΣΤΗΚΕ ΣΕ ΠΗ 8,25-8,50 ΚΑΙ ΣΕ ΘΕΡΜΟΚΡΑΣΙΑ 40 Ψ , ΕΝΩ ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΕ ΘΕΡΜΙΚΗ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ .ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΧΟΛΙΚΩΝ ΑΛΑΤ ΩΝ ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΕ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΗΣ ΕΣΤΕΡΟΛΥΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ ΚΑΙ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΕΝΗΣ ΠΡΟΣΤΑΣΙΑΣ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΠΕΨΗ ΜΕ ΤΗΝ ΤΡΥΨΙΝΗ .ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΤΟ ΤΑΥΡΟΧΟΛΙΚΟ ΝΑΤΡΙΟ ΑΥΞΗΣΕ ΤΗ ΘΕΡΜΙΚΗ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΤΗΣ ΤΕ ΜΟΡΦΗΣ ΚΑΙ ΠΑΡΕΙΧΕ ΠΡΟΣΤΑΣΙΑ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΑΛΛΑΓΗ ΤΟΥ ΠΗ .δΓΙΝΑΝ ΜΕΛ ΕΤΕΣ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΣΗΣ ΤΩΝ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΜΟΡΦΩΝ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΑΜΙΝΟΞΙΚΩΝ ΑΜΙΝΟΤΕΛΙΚΩΝ ΑΚΟΛΟΥΘΙΩΝ ΤΟΥΣ ΠΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΑΝ ΥΨΗΛΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΤΑ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ ΕΝΖΥΜΑ ΑΛΛΩΝ ΘΗΛΑΣΤΙΚΩΝ .ΕΠΙΣΗΣ ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ Ο ΣΥΝΔΥΑΣΜΟΣ ΤΨ-ΠΜΣΦ ΕΠΙΛΕΚΤΙΚΑ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΙ ΤΗΝ ΕΣΤΕΡΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟ ΤΗΤΑ ΚΑΙ Η ΧΡΗΣΗ ΤΟΥ ΚΑΤΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΛΙΠΑΣΗΣ ΘΑΑΥΞΑΝΕ ΤΗΝ ΑΞΙΟΠΙΣΤΙΑ ΤΟΥ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ .ΤΕΛΟΣ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΜΙΑ ΜΕΘΟΔΟΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΤΗΣ ΕΣΤΕΡΟΛΥΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥΠΛΑΣΜΑΤΟΣ ΜΕ ΚΥΡΙΟ ΓΝΩΜΩΝΑ ΤΗΝ ΕΛΑΧΙΣΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΗΣ ΠΑΡΕΜΒΟΛΗΣ ΤΗΣ ΑΛΒΟΥΜΙΝΗΣ.

IN THE PRESENT THESIS TWO FORMS OF CARBOXYLESTER HYDROLASES WERE ISOLATED TO HOMOGENEITY FROM RABBIT PANCREAS , THE DOC-FORM WITH M.W. 59 KDA AND PI 6,04 AND THE TC FORM WITH M.W. 61KDA FOR BOTH ENZYMES FORMS AND WERE FOUND 0,385 MM FOR THE DOC FORM AND 1,319 MM FOR THE TC-FORM .BOTH FORMS SHOWED HIGHER ELECTROLYTIC ACTIVITIES AT PH 8.25-8.50 AND AT 40 C , BUT EXHIBITED DIFFERENT THERMAL STABILITY OF THE TC FORM AND PROTECTED ELECTROLYTIC ACTIVITY DURIND PH CHANGES .SPECIFICITY STUDIS WERE PERFORMED FOR THE TWO ENZYME FORMS AND THEIR N-TERMINAL AMINOACID SEQUENCES WERE DEDUCED .BOTH ENZYME FORMS SHOWED HIGH HOMOLOGY WITH THE RESPECTIVE ENZYMES OF OTHER MAMMALS.IT WAS ALSO DEMONSTRATED THAT THE COMBINATION TC-PMSF SELECTIVELY INHIBITED ELECTROLYTIC ACTIVI TY AND COULD BE USED TO ENHANCE THE RELIABILITY OF LIPASE DETERMINATIONS .FINALLY A DETERMINATION METHOD FOR ELECTROLYTIC ACTIVITY WAS OPTIMISED FOR HUMAN PLASMA AIMING MAINLY AT THE MINIMALIZATION OF ALBUMIN INTEREFERENCE.