ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΡΙΩΝ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΩΝ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΩΝ ΑΠΟ ΣΥΚΩΤΙ ΠΟΝΤΙΚΟΥ

Abstract

AN ACIDIC, A NEUTRAL AND AN ALKALINE RIBONUCLEASE WERE ISOLATED FROM MOUSE LIVER CYTOPLASM, BY GEL FILTRATION, ION EXCHANGE AND AFFINITY CHROMATOGRAPHY. THE ACIDIC RIBONUCLEASE HYDROLYSES RNA OPTIMALLY AT PH 6.2, IN THE ABSENCE OF SALTS AND AT PH 5.5 IN SOLUTIONS WITH 150 MM OF MONOVALENT SALTS. IT IS NOT AFFECTED BY MG+2, ATP AND EDTA, BUT IT IS INHIBITED BY CA+2 AND ZN+2. IT IS ACID RESISTANCE AND HEAT LABILE. IT HYDROLYSES POLYPYRIMIDINORIBONUCLEOTIDES AND RNA IN NP-U AND GPAP-G BONDS. THE NEUTRAL RIBONUCLEASE HAS OPTIMUM PH 7.5 AND NEEDS 100-200 MM OF MONOVALENT SALTS. IT IS NOT AFFECTED BY ATP AND EDTA AND IS INHIBITED BY MG+2, CA+2 AND ZN+2. IT IS ACID AND HEAT RESISTANT. IT HYDROLYSES POLYPYRIMIDINORIBONUCLEOTIDES AND PYRIMIDINE-PURINE AND PYRIMIDINE-PYRIMIDINE BONDS IN RNA. THE ALKALINE RIBONUCLEASE HAS OPTIMUM PH 8.5, IN THE ABSENCE OF SALTS AND PH7 IN BUFFERS WITH 150 MM MONOVALENT SALTS. IT IS NOT AFFECTED BY ATP AND EDTA AND IS INHIBITED BY MG+2, CA+2 AND ZN+2. IT IS ACID AND HEAT RESISTANT. IT HYDROLYSES POLYPYRIMIDINORIBONUCLEOTIDES AND MAINLY POLY(C), RNA IS HYDROLYSED BY THIS ENZYME, IN THE SAME WAY AS BY THE NEUTRAL AND THE PANKREATIC RNASE. ALL THREE ENZYMES ARE ENDONUCLEASES AND THEY PRODUCE 3' PHOSPHOMONOESTERS. THEY DO NOTHYDROLYSE SS OR DS DNA. IN THE ABSENCE OF MONOVALENT SALT, THEY ARE ATTACHED STRONGLY ON THE POLYSOMES.

ΑΠΟ ΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑ ΣΥΚΩΤΙΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ, ΜΕ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΣΕ ΣΤΗΛΕΣ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΔΙΗΘΗΣΗΣ, ΙΟΝΙΚΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΚΑΙ ΑΓΧΙΣΤΕΙΑΣ, ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ ΜΙΑ ΟΞΙΝΗ, ΜΙΑ ΟΥΔΕΤΕΡΗ ΚΑΙ ΜΙΑ ΑΛΚΑΛΙΚΗ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ. Η ΟΞΙΝΗ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟ ΡΗ 6.2 ΑΠΟΥΣΙΑ ΑΛΑΤΩΝ ΚΑΙ ΡΗ 5.5 ΣΕ ΔΙΑΛΥΜΑΤΑ ΜΕ ΙΟΝΙΚΗ ΙΣΧΗ 150ΜΜ. ΔΕΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟMG+2, ΤΟ ATP ΚΑΙ ΤΟ EDTA, ΑΛΛΑ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ CA+2 ΚΑΙ ΤΟΝ ZN+2. ΑΝΤΕΧΕΙ ΣΤΑ ΟΞΕΑ, ΑΛΛΑ ΚΑΤΑΣΤΡΕΦΕΤΑΙ ΜΕ ΤΗ ΘΕΡΜΑΝΣΗ ΣΤΟΥΣ 100 C ΓΙΑ 5'. ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΤΑ ΠΟΛΥΠΥΡΙΜΙΔΙΝΟΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ, ΚΑΙ ΤΟ ΦΥΣΙΚΟ RNA ΣΤΟΥΣ ΔΕΣΜΟΥΣ NP-U ΚΑΙ GPAP-GP. Η ΟΥΔΕΤΕΡΗ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟ ΡΗ ΔΡΑΣΗΣ 7.5 ΚΑΙ ΑΠΑΙΤΕΙ ΑΛΑΤΑ ΣΕ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ 100-200ΜΜ. ΔΕΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ MG+2, ATP ΚΑΙ EDTA, ΚΑΙ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΑΠΟ CA+2 KAI ZN+2. ΑΝΤΕΧΕΙ ΣΤΑ ΟΞΕΑ ΚΑΙ ΣΤΗ ΘΕΡΜΑΝΣΗ. ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΤΑ ΠΟΛΥΠΥΡΙΜΙΔΙΝΟΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ ΚΑΙ ΤΟ ΦΥΣΙΚΟ RNA ΣΤΟΥΣ ΔΕΣΜΟΥΣ ΜΕΤΑΞΥ ΠΥΡΙΜΙΔΙΝΩΝ-ΠΟΥΡΙΝΩΝ ΚΥΡΙΩΣ, ΑΛΛΑ ΚΑΙ ΜΕΤΑΞΥ ΠΥΡΙΜΙΔΙΝΩΝ. Η ΑΛΚΑΛΙΚΗ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟ PH 8.5 ΣΕ ΔΙΑΛΥΜΑΤΑ ΧΩΡΙΣ ΑΛΑΤΑ ΚΑΙ PH 7 ΣΕ ΔΙΑΛΥΜΑΤΑ ΜΕ 150ΜΜ ΑΛΑΤΑ. ΔΕΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ATP ΚΑΙ ΤΟ EDTA, ΑΛΛΑ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΑΠΟ MG+2, CA+2 ΚΑΙ ΖΝ+2. ΑΝΤΕΧΕΙ ΣΤΑ ΟΞΕΑ ΚΑΙ ΣΤΗ ΘΕΡΜΑΝΣΗ. ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΠΟΛΥΠΥΡΙΜΙΔΙΝΟΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ ΚΑΙ ΚΥΡΙΩΣ POLY(C), ΕΝΩ ΤΟ RNA ΥΔΡΟΛΥΕΤΑΙ, ΟΠΩΣ ΚΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ΟΥΔΕΤΕΡΟ ΕΝΖΥΜΟ ΚΑΙ ΤΗΝ ΚΡΥΣΤΑΛΛΙΚΗ ΠΑΓΚΡΕΑΤΙΚΗ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ. ΟΛΑ ΤΑ ΕΝΖΥΜΑ ΕΙΝΑΙ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΕΣ, ΑΦΗΝΟΥΝ ΤΗ ΦΩΣΦΟΡΙΚΗ ΟΜΑΔΑ ΣΤΗΝ 3' ΘΕΣΗ ΤΩΝ ΟΛΙΓΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΩΝ ΠΟΥ ΔΗΜΙΟΥΡΓΟΥΝΤΑΙ ΚΑΙ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΥΝ ΠΛΗΡΗ ΑΔΥΝΑΜΙΑ ΝΑ ΥΔΡΟΛΥΣΟΥΝ ΜΟΝΟΚΛΩΝΟ 'Η ΔΙΚΛΩΝΟ DNA.ΣΕ ΑΛΚΑΛΙΚΟ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝ, ΑΠΟΥΣΙΑ ΑΛΑΤΩΝ, ΣΥΝΔΕΟΝΤΑΙ ΙΣΧΥΡΑ ΜΕ ΤΑ ΠΟΛΥΣΩΜΑΤΙΑ.