ΣΧΕΣΗ ΔΟΜΗΣ-ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΗΣ ΑΠΟΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΗΣ Β ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ

Abstract

IN THE PRESENT STUDY EVIDENCE IS PRESENTED CONCERNING THE INVESTIGATION OF THEINTRACELLULAR MECAHNISM WITH WHICH APOB ASSEMBLES WITH LIPIDS TO FORM LIPOPROTEIN AND CLARIFICATION OF THE ROLE OF SECONDARY AND TERTIARY STRUCTURE OF THE PROTEIN AND POSSIBLY OF ENZYMATIC ACTIVITIES IN THE FORMATION OF LDL. TWOCOMPLEMENTARY EXPERIMENTAL APPROACHES WERE FOLLOWED. THE FIRST DEALT WITH EXPRESSING AND ANALYZING HYBRID PROTEINS CONSISTING OF ALMOST ALL OF APOAI PROTEIN AND CONSECUTIVE OVERLAPPING FRAGMENTS OF APOB INSERTED AT THE CORBOXYL TERMINAL END OF APOAI BETWEEN THE RESIDUES 212-233, AND ANALYSIS OF THE RESULTING PROTEINS FOR THEIR ABILITY TO FORM LIPOPROTEIN. THE SECOND APPROACH DEALT WITH EXPRESSING AMINOTERMINAL FRAGEMNTS OF APOB (B29, B43 AND B47) AND ANALYZING THEM FOR THEIR ABILITY TO FORM LIPOPROTEIN. THE EXPERIMENTAL DATA LEAD US TO CONCLUDE THAT THE ABILITY OF APOB48 FOR INTRACELLULLAR ASSEMBLY INTO LIPOPROTEIN IS NOT DUE TO SPECIFIC SEQUENCES PRESENT ON DINSTICT FRAGMENTS OF APOB48 AND THAT THE LENGTH OF APOB REQUIRED FOR LIPOPTOTEIN FORMATION IN C217 IS MORE THAN 29% AND EQUAL OR LESS THAT 41% OF ITS MOLECULE. OUR CONCLUSIONS ARE IN AGREEMENT WITH A MODEL IN WHICH APOB AFTER ITS SYNTHESIS ASSUMES THE CORRECT TERTIARY STRUCTURE THAT ALLOWS (ENZYMATIC OR NOT) INTRACELLULAR ASSEMLY WITH LIPIDS. IN ADDITION LOPOPROTEIN FORMATION IN NON HEPATIC C217 CELLS SIGNIFIES THAT POSSIBLE ENZYMATIC ACTIVITIES OR OTHER PROTEIN REQUIRED FOR LIPOPROTEIN ASSEMBLY ARE NOT TISSUE SPECIFIC.

ΣΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΜΕΛΕΤΗ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΝΤΑΙ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΠΟΥ ΑΦΟΡΟΥΝ ΣΤΗ ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΟΥ ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΟΥ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΥ ΜΕ ΤΟΝ ΟΠΟΙΟ Η ΑΠΟΒ ΣΥΝΔΕΕΤΑΙ ΜΕ ΛΙΠΙΔΙΑ ΓΙΑ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΚΑΙ ΤΗΝ ΕΞΑΚΡΙΒΩΣΗ ΤΟΥ ΡΟΛΟΥ ΤΗΣ ΔΕΥΤΕΡΟΤΑΓΟΥΣ ΚΑΙ ΤΡΙΤΟΤΑΓΟΥΣ ΔΟΜΗΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΚΑΙ ΠΙΘΑΝΩΣ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΩΝ ΓΙΑ ΤΗΝ ΣΥΝΑΡΜΟΛΟΓΗΣΗΤΗΣ LDL. ΑΚΟΛΟΥΘΗΣΑΝ ΔΥΟ ΑΛΛΗΛΟΣΥΜΠΛΗΡΟΥΜΕΝΕΣ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΠΡΟΣΕΓΓΙΣΕΙΣ. Η ΠΡΩΤΗ ΣΥΝΙΣΤΑΤΟ ΣΤΗΝ ΕΚΦΡΑΣΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΥΒΡΙΔΙΚΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΠΟΥ ΑΠΟΤΕΛΟΥΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ΣΥΝΟΛΟ ΣΧΕΔΟΝ ΤΗΣ ΑΠΟΒ ΚΑΙ ΔΙΑΔΟΧΙΚΑ ΑΛΛΗΛΕΠΙΚΑΛΥΠΤΟΜΕΝΑ ΤΜΗΜΑΤΑ ΤΗΣ ΑΠΟΒΠΑΡΕΜΒΕΒΛΗΜΕΝΑ ΣΤΟ ΚΑΡΒΟΞΥΤΕΡΜΑΤΙΚΟ ΑΚΡΟ ΤΗΣ ΑΠΟΑΙ ΜΕΤΑΞΥ ΚΑΤΑΛΟΙΠΩΝ 212-233, ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΥΤΩΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΗΝ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΤΟΥΣ ΝΑ ΣΧΗΜΑΤΙΣΟΥΝ ΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΙΚΑ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑΤΑ. ΤΑ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΟΔΗΓΟΥΝ ΣΤΑ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ΟΤΙ Η ΙΔΙΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΑΠΟΒ48 ΝΑ ΣΥΝΔΕΕΤΑΙ ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΑ ΜΕ ΛΙΠΙΔΙΑ ΓΙΑ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΔΕΝ ΠΡΟΣΔΙΔΕΤΑΙ ΑΠΟ ΕΙΔΙΚΕΣ ΑΚΟΛΟΥΘΙΕΣ ΠΟΥ ΥΠΑΡΧΟΥΝ ΣΕ ΕΠΙΜΕΡΟΥΣ ΤΜΗΜΑΤΑ ΤΗΣ ΑΠΟΒ48 ΚΑΙ ΟΤΙ ΤΟ ΕΛΑΧΙΣΤΟ ΜΗΚΟΣ ΤΗΣ ΑΠΟΒ48 ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΕΙΤΑΙ ΓΙΑ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΛΙΠΟΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ C127 ΕΙΝΑΙ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΟ ΑΠΟ ΤΟ 29% ΚΑΙ ΜΙΚΡΟΤΕΡΟ Η ΙΣΟ ΜΕ ΤΟ 41% ΤΟΥ ΜΟΡΙΟΥ ΤΗΣ. ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΜΑΣ ΕΙΝΑΙ ΣΥΜΒΑΤΑ ΜΕ ΕΝΑ ΜΟΝΤΕΛΟ ΣΥΜΦΩΝΑΜΕ ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΜΕΤΑ ΤΗ ΣΥΝΘΕΣΗ ΤΗΣ Η ΑΠΟΒ ΑΠΟΚΤΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΛΛΗΛΗ ΤΡΙΤΟΤΑΓΗ ΔΟΜΗ ΠΟΥΤΗΣ ΕΠΙΤΡΕΠΕΙ (ΕΝΖΥΜΙΚΗ Η ΜΗ) ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΑ ΣΥΝΔΕΣΗ ΜΕ ΛΙΠΙΔΙΑ. (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)